[新品推荐]Biotin CAPture试剂盒

Biotin CAPture试剂盒是利用通用的不依赖配体的再生步骤来可逆捕获生物素化的分子。它具有若干优势，比如(i) 省去了为某一配体建立再生条件的需要；(ii) 让您能处理不稳定的配体；(iii) 在您改变实验、更换配体时避免了过去更换传感器芯片的需要。

通过共价键将配体直接固定在传感器芯片的表面是生物分子相互作用研究中最普遍使用的固定技术。尽管这产生了非常稳定的配体表面，但考虑到传感器芯片和偶联试剂的使用，首先寻找、其次优化固定条件的需要将是繁琐且昂贵的。Biotin CAPture试剂盒的使用避免了与经由共价键的直接固定的开发相关的努力。

生物素-链亲和素方法是配体通过共价键直接固定在传感器芯片上的一种替代方法。一般来说，生物素化的配体首先固定在链亲和素（SA）表面上，接着注射分析样品，这样配体与分析物之间的相互作用就能测定。最后，再生配体，为新一轮的样品循环做准备。这意味着再生步骤必须为每个配体而开发。此外，如果您想要研究一种新的配体，您不得不制备新的传感器芯片。此过程很繁琐，且花费高。在某些情况下，如配体不稳定或再生条件无法确立，计划好的实验可能不得不放弃。Biotin CAPture试剂盒的应用克服了生物素-链亲和素固定方法的种种限制。

Biotin CAPture试剂盒带来了：

• 速度及便利性：无需了解或建立固定方法或再生步骤，即可研究相互作用。只需要生物素化的配体。
• 实验范围扩大：研究不稳定的配体或再生步骤尚未确立的配体。由于传感器芯片表面是利用标准化的步骤在每个循环中再生和重建的，所以这个过程可以实现。
• 经济：当您需要更换实验的配体时，可保留相同的传感器芯片，省时省力又省钱。

方法概述

固定技术
此试剂盒是基于新颖的捕获概念，能实现生物素化分子的可逆捕获及通用的再生（图1）。传感器芯片CAP是基于羧甲基化的葡聚糖基质，它上面预固定了单链DNA分子。Biotin CAPture试剂包含了与互补的单链DNA分子结合的链亲和素。偶联过程如下：(i) 将Biotin CAPture试剂注射到传感器芯片的表面并杂交；(ii) 接着注射并捕获生物素化配体；(iii) 随后注射分析样品。最后，再生传感器芯片表面，用于新的实验循环。

图1. Biotin CAPture试剂盒中所使用的新颖捕获概念的示意图。

Biotin CAPture试剂盒的内容
此试剂盒有两个版本，分别适用于每种传感器芯片形式。Biotin CAPture试剂盒适用于Biacore X100和Biacore 3000（及其它经典系统，尽管这些未经过验证）。Biotin CAPture试剂盒，S系列适用于Biacore T100。尽管Biotin CAPture试剂盒也可用于Biacore A100系统，但诸如芯片利用、流速及试剂盒所需的循环时间等因素可能会限制它在此系统中的使用。

Biotin CAPture试剂盒的范围

试剂盒在Biacore系统中的性能如下：

Biotin CAPture试剂盒
• Biacore X100：80次注射
• Biacore 3000：140次注射

Biotin CAPture试剂盒，S系列
• Biacore T100：100次注射

不同系统间试剂盒范围的差异是由不同的样品顶部体积或流体死体积所引起的。Biacore A100系统的更高流速将试剂盒的能力限制到只有20次注射。

结合能力
根据生物素化配体的大小，生物素结合表面的结合能力有差异，这类似于传感器芯片SA，但对于分子量为150000的配体，它一般在1500到3000 RU的范围。这比传感器芯片SA要低，但对于Biacore系统中进行的大部分应用和分析物而言，也是足够的。相对较低的结合能力可能对低分子量分析物（如低于5000）的应用是一个限制因素。

样品
此试剂盒与Biacore系统所使用的大部分样品及分析物兼容。然而，它却不适合包含DNA-结合蛋白、寡核苷酸或降解DNA的酶的实验，因为分析中含有寡核苷酸。此外，血清或血浆样品往往在传感器芯片表面产生高水平的非特异结合。在样品中加入低分子量双链DNA，有时能阻止此种类型的非特异结合。

重现性
为了确保传感器芯片表面在运行期间维持了相同的性质，用Biotin CAPture试剂让每个再生循环产生相同的响应是很重要的。分析中每个阶段的结合水平是高度重现的，如图2所示。

图2. 利用Biotin CAPture试剂盒进行10次重复循环的叠加曲线。样品是由瑞典Affibody™提供的。

Biacore系统中对Biotin CAPture试剂盒的支持
Biacore X100：Biacore X100软件（2.0版或更高）通过基本单元中指导性的流程对Biotin CAPture试剂盒提供了全面的支持。它能够运行单个或多个循环的动力学。

其它Biacore系统：利用MDL或Method Builder及定制的传感器芯片配件，Biotin CAPture试剂盒能用于其它所有Biacore系统（Biacore S51和Biacore Flexchip除外）。

Biotin CAPture试剂盒的应用
单循环动力学分析AffibodyZ477分子与人表皮生长因子受体2（HER2）之间的相互作用
为了研究Z477和HER2之间的蛋白-蛋白相互作用，我们利用传感器芯片SA和Biotin CAPture试剂盒在Biacore X100系统上开展了两个单循环动力学运行。图3的结果显示Biotin CAPture试剂盒在动力学鉴定中的性能堪比传感器芯片SA。

图3. (A) Biotin CAPture试剂盒及(B) 传感器芯片SA的单循环动力学。

总结
在Biacore系统的生物分子相互作用研究中，Biotin CAPture试剂盒是一种易用、多功能且可靠的固定工具。它克服了其它固定方法的限制，提供了若干优势，让您能快速一致地研究生物分子的相互作用。Biotin CAPture试剂盒与传感器芯片SA的比较动力学鉴定产生了类似的结果。点击索取详细产品资料