分离调节性T细胞的利器[新品推荐]

调节性T细胞（Treg）是抑制性T细胞的一种功能亚群。它们抑制了不需要的免疫反应，有可能在自体免疫疾病、癌症的治疗以及器官移植中发挥重要作用，因此也就成了目前研究的热点。

过去，由于Treg细胞表面缺乏特异的细胞表面标志物，且这些细胞在外周血中的频率低，Treg的分离就成了一件困难的事情。过程漫长，且效率不高。然而，Treg研究领域发展迅速，人们不断发现新的细胞表面标志物，将Treg与其他类型的T细胞区分开。这些标志物让Treg细胞的分离逐渐改善。最近上市的一些新产品或许能加速Treg的分离和纯化。

对于细胞分离，磁珠和抗体是最常见的选择。拥有金标准MACS技术的美天旎公司近期推出了两款Treg分离试剂盒，分别为CD4+ CD25+ CD127dim/– Regulatory T Cell Isolation Kit II和CD25+ CD49d- Regulatory T Cell Isolation Kit。

CD4+ CD25+ CD127dim/– 调节性T细胞的分离是利用生物素化的抗体混合物和抗生物素的磁珠来进行的，分离过程中去除了非CD4+和CD127high细胞，随后用CD25 MicroBeads II进行阳性筛选。CD127是IL-7受体的α链，它表达在大多数成熟T细胞上，且在增殖和分化中扮演了重要角色。然而，在调节性T细胞上，CD127缺失。因此，CD127可以作为另外的标记物，来区分人调节性T细胞和激活的T细胞。

CD25+ CD49d- 调节性T细胞的分离分为两步。首先，CD8+和CD49d+ 细胞经过磁性标记，之后去除。其次，CD49d- 调节性T细胞被CD25磁珠标记，然后通过阳性选择而分离。第一步的去除除掉了污染的CD25+ T细胞，从而提供了高纯度的调节性T细胞。

StemCell公司则综合了两个细胞分离平台——RosetteSep和EasySep，整合成完整的Treg分离试剂盒。Treg细胞的分离分成两步，在RosetteSep上通过阴性选择预富集细胞，接着在EasySep上阳性选择CD25+细胞。从全血或buffy coat中获得纯的Treg，整个过程仅需要三个小时。这种不需要柱子的试剂盒使用简单，对细胞也很“温柔”，获得的Treg细胞能立即用于下游分析。

StemCell上个月还发布了两款高效分离Treg细胞的试剂盒，分别为the Complete Kit for Human CD4+CD127lowCD25+ T Cells及the Complete Kit for Human CD4+CD127lowCD49d-CD25+ T Cells。这两款试剂盒与上面美天旎的试剂盒原理类似，也是基于CD127的低表达，及CD49d的不表达。

也许你担心细胞上的磁珠或抗体可能会干扰下一步实验。Life Technologies则提供了一种方案，能够分离出不带磁珠或抗体的人CD25hiCD4+foxP3+ Treg细胞。分离过程分为以下几步：首先从PBMC中阴性分离出untouched的人CD4+ T细胞，然后在这个细胞亚群中阳性选择出CD25+的T细胞，再利用DETACHaBEAD从CD4+CD25+ Treg细胞中去除磁珠。

来自Life Technologies的科学家Karoline Schjetne表示：“有了这个产品，你就能同一个起始材料中分离出效应T细胞和调节性T细胞，用于抑制分析或扩增。”

在不久的将来，潜力巨大的Treg细胞将用于多种临床试验，比如自体免疫疾病、器官排斥等。如何将Treg细胞的分离与扩增与临床应用结合起来，这或许是研究人员面临的最大挑战。（生物通 余亮）