GPCR 研究方案-多样化的HTRF细胞平台[创新技巧]

GPCR 的研究在药物研究领域中占有主导地位。Cisbio为GPCR领域的实验优化、药物筛选提供了很多年领先的实验方案和良好的技术支持。目前Cisbio为GPCR研究提供的平台有：功能性实验平台，包括检测第二信使环化腺核苷一磷酸(cAMP) 和一磷酸肌醇(IP-1), 以及细胞水平的磷酸化ERK检测(Cell’ERK)；新的Tag-liteTM细胞表面受体研究平台，可用于检测GPCR的二聚化，同时这也是目前唯一的非放射性的配体结合实验方案，从而意味着Cisbio现在为GPCR药物研究领域的进展提供了先进的试剂和技术。

系列（一），cAMP细胞水平检测

Cisbio有三种试剂盒可用于检测cAMP，这三种试剂盒都是采用了HTRF技术。而每一种试剂盒都是针对特定范围的cAMP浓度，从而确保了实验的灵敏度。这些试剂盒都适用于96孔， 384孔或者1536孔的细胞水平的药物筛选实验。

产品特点：
1， 适用于高通量筛选(HTS)的高效率的单板实验方案
2， 很低的假阳性和假阴性结果
3， 稳定的EC50，持续时间从半小时到7天
4， 实验体积可缩小到10ul以下
5，新鲜细胞或冻存细胞都能使用

产品应用：
1， Gs或Gi偶联受体
2， 激动剂和拮抗剂的筛选
3， 磷酸二酯酶(PDE)活性检测
4， 腺苷酸环化酶(AC)的活性评估

实验原理：

 
IBMX: 3 Isobutyl-1-Methylxanthine

GPCR同激动剂结合后会发生结构改变，从而活化腺苷酸环化酶（AC），进一步催化ATP生成cAMP, 同时cAMP又在磷酸二酯酶（PDE）作用下进一步降解成AMP, 而IBMX可以抑制PDE的活性，从而抑制cAMP降解成AMP。因此可以通过在实验中加入IBMX检测累积的cAMP量， 而cAMP的量可以直接反映化合物对GPCR介导的AC是活化还是抑制。
 

该试剂盒可直接对cAMP定量。其原理是基于HTRF技术。细胞所产生的cAMP和试剂盒所提供的标记了d2的cAMP之间进行免疫竞争抗cAMP抗体的抗原结合位点。当标记了铕或铽的单克隆抗体跟d2标记的cAMP结合后会有比较大的信号，随着细胞内产生的cAMP增多，信号逐渐减小。

为了满足各种自动化仪器操作，根据细胞活化后的步骤，每个试剂盒都提供了一步或两步加样方案。

产品规格：

三组试剂盒涵盖了广泛的细胞水平的实验。

 
 
cAMP femto, 是最灵敏的cAMP试剂盒，目前有铕和铽标记的两种。这两种试剂盒都能检测到28pM cAMP (0.6 fmoles/well in 20µl volume)。因而可以用很低的细胞密度，可以用100至500细胞/孔。

cAMP dynamic 2, 比较大的cAMP浓度检测范围，适合于大多数Gi/s实验。

cAMP HiRange , 拥有很大的信号-背景比值(Z’>0.9), 适合于HTS和用制备的膜进行的实验。

实验性能：
 

CHO-K1 cells were stimulated with Methylhistamine in the presence of 30 µM forskolin (EC80). 20 µl assays were performed in 384-well plates. Plates were read at times ranging from 1 hour to 7 days.

所有的cAMP试剂盒都不受培养基添加物如血清，生物素，有颜色的化合物的影响，并且达到5%的DMSO耐受性。 cAMP实验可以采用新鲜的悬浮和贴壁细胞，冻存细胞。用三种试剂盒测出的IC50在7天后依然很稳定，这也是药物筛选中的一个显著优势。

应用举例：
 

Identification of human endogenous calcitonin receptor in 293H cell by cAMP

四种激动剂和一种拮抗剂分别作用于降钙素受体（Gs），具体实验方法欢迎咨询[e-mail]

订购信息：
所有的产品都包括1000， 20000， 100000 test的包装，具体如下：

作者：谢兵， 周时勇
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