5月冷泉港实验方案聚焦活体成像和农杆菌转化[创新技巧]

【字体: 时间:2010年05月07日 来源:生物通

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  5月号的冷泉港实验方案于近日发布。依照惯例,其中2个实验方案是供读者免费阅读的。第一个实验方案是由美国德克萨斯大学的学者们提供的,描述了非洲爪蟾胚胎的标记方法,以及用共聚焦显微镜对发育过程进行高放大倍数的时间延迟成像。第二个实验方案则描述了一种快速的农杆菌转化方法,用于瞬时的基因表达分析。

5月号的冷泉港实验方案于近日发布。依照惯例,其中2个实验方案是供读者免费阅读的。第一个实验方案是由美国德克萨斯大学的学者们提供的,描述了非洲爪蟾胚胎的标记方法,以及用共聚焦显微镜对发育过程进行高放大倍数的时间延迟成像。第二个实验方案则描述了一种快速的农杆菌转化方法,用于瞬时的基因表达分析。

非洲爪蟾(Xenopus laevis)的胚胎是活体成像的理想模型。这种外表上发育的胚胎比内部发育的哺乳动物胚胎更适合活体分析,而且胚胎体积大,这让它们特别适合于组织水平的形态发生事件的时间延迟分析。此外,爪蟾胚胎中的单个细胞比脊椎动物模型中的细胞要大,这样也适合细胞行为和亚细胞过程的成像。爪蟾胚胎很容易进行基因功能的操作,比如knockdown和异常表达,即使是没有经验的研究人员,每天也能开展数百次操作。

尽管卵黄不透明可能会妨碍完整胚胎的深入成像,但早期胚胎的几乎所有细胞都能置于器官型培养,这样感兴趣的细胞能直接放置在盖玻片上。此外,固定组织的免疫染色和原位杂交也是活体成像技术的很好补充。本实验方案描述了爪蟾胚胎的标记方法,以及用共聚焦显微镜对发育过程进行高放大倍数的时间延迟成像。详细的实验步骤请点击标题链接。

High-Magnification In Vivo Imaging of Xenopus Embryos for Cell and Developmental Biology

基因组测序已经鉴定出拟南芥及其他植物中多个基因。为了破译这些未知的基因功能,研究人员开发出一些瞬时表达分析,作为转基因植物这个冗长过程的替代。在这些瞬时分析中,农杆菌介导的转化利用了农杆菌将外源DNA转移到带完整细胞壁的植物细胞的天然能力。不过,这种应用的成功例子不多,且可变性大。

在本实验方案中,美国田纳西大学的研究人员描述了一种快速的农杆菌介导的幼苗转化(简称FAST)技术,用于瞬时的基因表达分析。在表面活性剂Silwet L-77存在的情况下,将植物幼苗与农杆菌共培养。幼苗很容易生长,且对农杆菌转化更为敏感。表面活性剂促进了植物细胞的转化。此方案提供了一种快速、高效且经济的植物基因功能分析,手工操作极少,且不需要复杂的设备。详细的实验步骤请点击标题链接查看。

FAST Technique for Agrobacterium-Mediated Transient Gene Expression in Seedlings of Arabidopsis and Other Plant Species

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