Clontech推出非整合型慢病毒[新品推荐]

Clontech对整合酶蛋白进行突变，推出了整合酶缺陷型的Lenti-X HTX慢病毒包装系统。这种整合酶缺陷型的慢病毒在目的细胞中产生了环状附加体，这些载体在分裂细胞中瞬时表达，但在静息细胞中稳定表达。与整合型慢病毒相比，IDLV导致插入突变的风险大大降低，适合iPS研究、RNA干扰、同源重组等应用。

慢病毒载体因能高效感染分裂细胞和静息细胞，而成为基因导入的有力工具，近年来被广泛使用。慢病毒载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而实现持久性表达。市售的大部分慢病毒包装载体都产生能高效整合的慢病毒。然而，慢病毒的随机整合会带来插入突变的风险。于是，研究人员也期望用到非整合型的慢病毒包装系统。

Clontech对整合酶蛋白进行突变，推出了整合酶缺陷型的Lenti-X HTX慢病毒包装系统。这种整合酶缺陷型的慢病毒（简称IDLV）在目的细胞中产生了环状附加体，这些载体在分裂细胞中瞬时表达，但在静息细胞中稳定表达。与整合型慢病毒相比，IDLV导致插入突变的风险大大降低，适合iPS研究、RNA干扰、同源重组等应用。

Lenti-X HTX慢病毒包装系统属于第四代的包装系统，它将pol基因也分离出来，使gag、pol和env成为三个独立载体，而不是两个载体，从而大大降低了产生具有复制能力的病毒的可能性，进一步提高了生物安全性。此系统与Clontech慢病毒载体配套使用可以制备出高滴度的慢病毒颗粒，无需浓缩即可达到 5x10⁸ IFU/ml。之所以能制备高滴度的病毒颗粒，主要有以下三个关键因素。

首先，Lenti-X HTX Packaging Mix中各载体的比例是经过优化的，极大地提高了病毒包装所需蛋白的表达量。其次，引入了Tet-Off转录激活子(tTA)，形成病毒包装蛋白的级联放大表达效应，极大地提高了病毒包装蛋白的表达量。第三，新型的转染试剂Xfect转染效率高，可以高效地转染Lenti-X 293T包装细胞系，制备出高滴度的慢病毒颗粒。本系统可以与任何慢病毒表达载体相兼容。

主要优点：
• 增殖细胞中的瞬时基因表达，非分裂细胞中的稳定表达
• 采用VSV-G包膜，宿主范围广泛
• 高效的基因转导，不会插入宿主基因组
• 插入突变的风险低
• 与任何慢病毒载体配套使用，产生非整合型的慢病毒
• 产生高滴度慢病毒

此外，Clontech公司还新推出了Lenti-X Accelerator，可快速转导慢病毒及MMLV逆转录病毒，是敏感细胞类型包括干细胞在内的理想选择。

Lenti-X Accelerator 包含带有电荷的磁珠，可以选择性地结合病毒上清液中的病毒颗粒并且吸附于磁性区域的靶细胞表面。这个过程不是依赖于扩散，而是通过增加靶细胞表面病毒的局部浓度来实现高效转导的目的。其操作简单快速，只需将磁珠和病毒颗粒预孵育20 min之后转导5 min即可完成，而常用的Polybrene则需过夜转导。快速转导缩短了敏感靶细胞在病毒上清液的暴露时间，降低了细胞毒性。

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延伸阅读：

2008技术点评：慢病毒载体