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线粒体膜电位探针使用指南[创新技巧]
【字体: 大 中 小 】 时间:2011年02月18日 来源:生物通
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美国罗彻斯特大学医学及牙医学院的研究人员撰写了一篇使用指南,讨论了线粒体膜电位探针使用过程中一些重要的技术考虑、控制以及平行互补分析。文章发表在最新一期的《BioTechniques》上。
在评估线粒体功能时,常常要用到监控线粒体膜电位的探针,就是大家常常提到的JC-1、Rhodamine 123等。然而,在使用过程中,还需要仔细考虑多个控制,以及非质子电荷对染料行为的影响,才能正确地阐释结果。为此,美国罗彻斯特大学医学及牙医学院的研究人员撰写了一篇使用指南,讨论了实验过程中一些重要的技术考虑、控制以及平行互补分析。文章发表在最新一期的《BioTechniques》上。
近年来,测量线粒体膜电位的荧光染料已成为常用的工具,来监测重要的线粒体参数的改变。线粒体膜电位本身是细胞健康或受损的重要指示剂。而这些染料一般是亲脂性阳离子化合物,它们在线粒体膜基质空间中积累,与Δψm呈反比。
测量线粒体膜电位的染料有很多种,包括TMRM、TMRE、Rhodamine 123、DiOC6(3)、JC-1等,每一种都有其优势和劣势。作者在文章中就介绍了常用染料的优势以及潜在的困难,并强调了在生命科学研究中突出其有效应用的最佳方法。
对于如何计划实验,作者也给出了具体的建议。通常有两种类型的实验:第一种,在细胞或组织的慢性处理之后,研究人员希望确定Δψm如何改变;第二种,研究人员希望监测急性处理相对应的Δψm变化。尽管乍一看,第二种方法似乎更为困难,但实际上每个样品/条件都能充当急性处理前的基线或内对照,因此通常能提供更容易阐释的结果。作者还详细讨论了两种方法的考虑因素。
至于选择哪一种方法来使用染料,使用何种染料,作者认为这是由实验需求确定的。这些染料可在淬灭或非淬灭模式下使用。淬灭模式只适用于第二种类型实验中Δψm的快速变化,而对于较为缓慢的变化,或确定实验处理后两个群体的Δψm差异,则适合非淬灭模式。
此外,作者还详细列出了用阳离子探针测量Δψm的实验指南,一步一步,相当详细,非常适合入门者学习。最后,作者还提到了一些关于染料上样和检测的考虑因素,利用多个方法来定量荧光变化,控制线粒体形态、定位或质量的变化等。
这篇文章是可以免费查看的,如果您正准备开展线粒体膜电位方面的研究,那不妨看看,真的很实用。(生物通 薄荷)
原文阅读:
Mitochondrial membrane potential probes and the proton gradient: a practical usage guide
BioTechniques, Vol. 50, No. 2, February 2011, pp. 98–115