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新型的四环素诱导表达系统[新品推荐]

【字体: 时间:2011年03月09日 来源:生物通

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  Clontech推出的四环素诱导表达系统名为Tet-Expression Inducible Expression System,比之前广泛使用的Tet-On/Tet-Off表达系统更快、更简单。与Tet-On/Tet-Off不同,Tet-Express系统只需要单个载体和Tet-Express转导蛋白。诱导表达时,只需在细胞培养基中加入几微升Tet-Express,即可让所有细胞类型处于四环素控制的转录之下。

Clontech公司一度曾是蛋白表达领域的领头羊,不过这几年,它沉寂了很多。近日,Clontech宣布推出新型的四环素诱导表达系统,向世人证明它在此领域仍然是相当强的。

Clontech推出的四环素诱导表达系统名为Tet-Expression Inducible Expression System,比之前广泛使用的Tet-On/Tet-Off表达系统更快、更简单。与Tet-On/Tet-Off不同,Tet-Express系统只需要单个载体和Tet-Express转导蛋白。诱导表达时,只需在细胞培养基中加入几微升Tet-Express,即可让所有细胞类型处于四环素控制的转录之下。

什么是Tet-Express?

Tet-Express是一种Tet-Off高级转录激活因子蛋白,它经过修饰和优化,能进行自我转导,也就是说,它能够通过蛋白转导通路自行穿过细胞膜进入细胞核。在没有四环素的情况下,Tet-Express结合PTRE3G启动子,并激活表达。这与Clontech的Tet-On 3G系统有些类似,但省了一个表达四环素反式激活因子的载体,整个实验也就简单了很多。

基因表达的快速诱导

首先,将您的目的基因克隆到TRE启动子之下。若需要表达目的蛋白,立即加入Tet-Express,基因表达会快速上升,两小时后达到最大值的80%以上。若暂时不想表达目的蛋白,那就不加Tet-Express,就这么简单。下图显示了用Tet-Express处理或未处理的HeLa细胞中萤光素酶的表达量。

Tet-Express的出现替代了表达反式激活因子的载体,也就无需对细胞系进行多轮的克隆筛选,这特别适合那些不能进行多轮筛选的细胞,如原代细胞。经过Clontech验证,Tet-Express在多种细胞系中都很有效,如293T、MCF7和HepG2。

极低的本底表达

Tet-Express和Tet-On 3G系统中都包含了pTRE3G载体。此载体的可诱导启动子(PTRE3G)确保了极低的本底表达以及诱导后极高的表达。它在CMV启动子的上游包含了7个相同的tetO重复片段,也就是反式激活因子的结合位点,我们称之为四环素反应元件(TRE)。

由于PTRE3G缺乏内源转录因子的结合位点,且缺乏反式激活蛋白时CMV启动子失活,所以PTRE3G的本底表达是目前包含TRE的启动子中最低的。实验证明,Western分析无法检测到本底表达。然而,在反式激活因子存在时,表达可被诱导到一个非常高的水平。

不同的载体选择

Tet-Express诱导表达系统有四种不同的载体形式,分别为pTRE3G(普通版)、pTRE3G-IRES(双顺反子)、pTRE3G-mCherry(共表达红色荧光蛋白)和pTRE3G-ZsGreen1(共表达绿色荧光蛋白)。表达系统中除了载体,还包括:Tet-Express(25次)、对照载体(表达萤光素酶)、潮霉素和嘌呤霉素线性选择标记、FBS及Xfect™ 转染试剂。

由于是新品上市,所以价格暂时未知。若您对此系统感兴趣,欢迎点击此处索取资料和报价。(生物通 余亮)

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