荧光定量“双核”时代已经到来[新品推荐]

【字体: 时间:2011年04月11日 来源:生物通

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  荧光定量PCR技术自1995年诞生并应用于生命科学领域以来,以突飞猛进的速度在全世界发展;与其密不可分的重要部分——荧光定量PCR试剂也是日新月异。近日,TIANGEN推出SuperReal PreMix试剂,让荧光定量PCR试剂又进入一个全新的时代——“双核时代”。

荧光定量PCR技术自1995年诞生并应用于生命科学领域以来,以突飞猛进的速度在全世界发展;与其密不可分的重要部分——荧光定量PCR试剂也是日新月异。近日,TIANGEN推出SuperReal PreMix试剂,让荧光定量PCR试剂又进入一个全新的时代——“双核时代”。

以往,荧光定量PCR试剂中的热启动酶往往只有一种,要么是抗体修饰,要么是化学修饰。抗体修饰的热启动酶起效快,可在反应初期被完全激活,发挥最大活性,但后力不足;而化学修饰的热启动酶则比较慢热,在高温变性过程中缓慢释放活性,从而保证始终特异的扩增。

如今,全新的SuperReal PreMix结合了两者的优点,在单个试剂中包含两个热启动酶——化学修饰的HotStar Taq DNA聚合酶和抗体修饰的Anti Taq DNA聚合酶。两者通过互补缓释技术构成了独特的酶活自动调节系统,再配合精心优化、并含有独创H-bond因子的buffer体系,可以在更加宽广的范围内获得更高的扩增效率、特异性以及广泛的模板适应性。

独特的双热启动酶自动调节系统——稳定、高效的扩增

SuperReal PreMix采用了独特的双组分热启动酶自动调节系统进行荧光定量PCR扩增,它由高端化学修饰HotStar Taq DNA聚合酶和抗体修饰Anti Taq DNA聚合酶组成。在PCR反应初期,已被完全激活的Anti Taq DNA聚合酶可以协同被缓慢释放活性的HotStar Taq DNA聚合酶达到最佳酶活状态,保证PCR扩增的高效性;在后续PCR反应过程中,每经过一轮95℃条件下的变性,即可重新激活一部分HotStar Taq DNA聚合酶,弥补因热变性所导致的部分酶活损失。HotStar Taq DNA聚合酶独特的酶活缓释机制使其可以与Anti Taq DNA聚合酶构成独特的酶活自动调节系统。相对于单一的抗体封闭或者化学修饰的热启动酶,SuperReal PreMix在荧光定量PCR反应全程均能实现稳定、灵敏和高效的扩增。

在cDNA模板的平行扩增实验中,双热启动酶自动调节系统在检测不同浓度模板时,相对于单一热启动酶的试剂体系,检测到的Ct值更为靠前(约提前1-2个循环),线性关系也更好(图1)。此外,在一些反应体系中,与传统的单酶扩增体系相比,双酶自动调节系统扩增曲线荧光灵敏度更强,扩增效率更高(图2)。
 

图1


 
图2. 上为双热启动酶自动调节系统,下为传统的单酶体系。

独创的富含H-bond因子缓冲液体系——更强的反应特异性、更好的重复性

在SuperReal PreMix的buffer体系中,天根平衡了K+和NH4+的比例,提高引物模板退火条件的严谨性,令非特异引物结合模板的比例大大减少,进一步减少非特异性扩增,提高反应的专一性。此外,buffer体系还特别添加了独创的H-bond因子,能协同调整反应体系中的氢键作用力。有了这两个秘密武器,定量PCR的专一性增强,重复性更好。

对于同一个较难扩增的模板,SuperReal PreMix的H-bond因子缓冲液体系相对于普通缓冲液体系的反应特异性更强,重复性更好(图3)。

 

A公司的缓冲液体系

 

B公司的缓冲液体系

 
 
TIANGEN公司的H-bond因子缓冲液体系
 
图3 H-bond因子缓冲液体系与普通荧光定量缓冲液体系比较

双热启动酶系统与H-bond因子缓冲体系的完美结合——对于复杂来源模板体系的广泛适应性

SuperReal PreMix的两个最主要技术优势的完美结合使其性能有了本质的提高,经过TIANGEN研发科学家对近百种引物、模板反应体系的测试及百余名客户的亲自试用,发现其相对于传统试剂,对于来源不同的复杂模板均呈现较好的适应性,且对于模板中抑制剂的耐受度显著提高(图4)。

人源体系:


 
鼠源体系:


 
植物来源体系:


 
图4 对于不同来源模板的广泛适应性

您瞧,对于不同来源的多种复杂模板,SuperReal PreMix均呈现出较好的适应性。如果您目前正在为复杂模板而发愁,那不妨试试SuperReal PreMix,欢迎将实验结果与大家分享。点击申请试用装

(生物通 余亮)

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