细胞分离Tip:降低血小板污染[心得点评]

【字体: 时间:2011年07月18日 来源:生物通

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  加拿大Stemcell公司(STEMCELL Technologies Inc.)是细胞培养方面的专家,提供多种干细胞的培养基和鉴定产品,以及细胞分选的多个系统,其产品以产品新、品质高、重现性好闻名于生命科学和医学研究领域。Stemcell公司每月都会发布一个技术小贴士,给细胞培养人员以指导。生物通特摘录一些,编译后与读者分享。

加拿大Stemcell公司(STEMCELL Technologies Inc.)是细胞培养方面的专家,提供多种干细胞的培养基和鉴定产品,以及细胞分选的多个系统,其产品以产品新、品质高、重现性好闻名于生命科学和医学研究领域。Stemcell公司每月都会发布一个技术小贴士,给细胞培养人员以指导。生物通特摘录一些,编译后与读者分享。文中若涉及产品,除特别声明外,均为Stemcell公司产品。

血小板与红细胞、白细胞并称三大血细胞,有凝血作用。血小板是由骨髓中成熟的巨核细胞裂解,胞质脱落而形成的,每个巨核细胞可产生2000~7000个血小板。血小板很粘稠,而且特别喜欢与单核细胞黏在一起。

Stemcell的大部分阴性选择试剂盒都包含了一个细胞表面标志物,能选择性去除血小板。然而,单核细胞富集试剂盒及其他少数试剂盒不能靶定血小板,然后将其清除,因为那样会去除单核细胞或其他想要的细胞类型。因此,在分离单核细胞时,我们就必须采取措施来降低血小板污染。

在制备单核细胞悬液时,Stemcell给出了如下的建议:

1. 从Ficoll密度梯度离心中取出单核细胞层时,避免吸到富含血小板的血浆。
2. 缓慢离心,洗涤单核细胞(120×g,10分钟,常温)。
3. 小心弃上清,其中含有血小板,用新鲜的缓冲液重悬细胞(记得换个干净的吸头)。
4. 重复上面2步,总共洗涤3次。

另外,Stemcell还给出了一些降低血小板污染的其他建议:

• 使用大口径的针来抽取血液样本
• 轻轻地抽血,如果使用注射器推杆,不要大力牵引
• 抽血时使用更多的抗凝血剂,比如,增加肝素、EDTA或ACD的量
• 使用不含钙镁的缓冲液进行洗涤和细胞分离
• 在细胞分离缓冲液中使用更高水平的EDTA(2或3 mM)
• 确保轻柔操作,不要震荡

Stemcell公司的产品包括:检测造血干细胞功能的半固体培养基MethoCult®和MyeloCult®系列,培养和鉴定间充质干细胞的MesenCult®系列,培养和分析神经干细胞的NeuroCult®系列,培养胚胎干细胞和多能干细胞的Es-Cult®系列产品,可以分选各种细胞的免疫磁性分选系统EasySep®,全自动细胞分选仪RoboSep®,全自动克隆挑选系统EasyPick®,及与其配套使用的ClonaCell®-HY试剂等等。(生物通 余亮)

 

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