支原体检测与去除技术的革命性变化[新品推荐]

支原体

支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体。大小一般在0.3-0.5um之间，缺乏细胞壁呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。能通过滤菌器、可在无生命培养基中生长繁殖，在自然界分布极为广泛。可对人、动物、植物、昆虫等治病，造成极大危害。

细胞培养中支原体的危害

支原体在分类学上是处于细菌和病毒之间的一种微生物，是细胞培养中最常见的一种污染源，被支原体感染的细胞培养物其正常的生长和代谢会受到极大的影响。而重组表达的蛋白质，其活性也会受到影响，甚至完全失去活性。同时，支原体污染会对培养细胞的分子水平研究带来偏差或假阳性的实验结果。有研究表明，世界范围内细胞培养物被支原体污染率在20%～50%之间。

支原体对细胞的影响，主要从两方面考虑：一方面是对细胞的直接影响，细胞被支原体污染后，增殖缓慢，部分细胞变圆，从瓶壁上脱落，部分细胞虽然表面变化不十分明显，实际上潜伏着多方面的危险；另一方面，支原体可以通过消耗培养基中的精氨酸，抑制细胞DNA、RNA的合成，降低细胞的抵抗力。总之，支原体感染会对细胞造成的影响是多方面的：包括代谢、免疫或生化特性、生长状况、酶的作用途径、细胞膜的组成、染色体结构、转染效率、以及细胞存活等多方面的改变。

支原体难以检测，同时也很难消除，它们能轻易地通过标准滤膜，同时也能拮抗绝大多数的抗生素。而且，支原体污染细胞后．培养液可不发生混浊．多数情况下细胞病理变化轻微或不显著，细微变化也可由于传代、换液而缓解．因此易被忽视。因此，在细胞培养过程中，对支原体的防范、检测和去除非常棘手，也非常重要。

支原体的防范措施

首先要从污染的源头预防，购入的未灭活血清应采取56℃，水浴灭活30min的措施以使血清中的支原体灭活。对新引进的细胞系应加强观察，防止外来的污染源。定期消毒CO2培养箱，所用器皿必须严格消毒，确保无菌。超净台要定期更换滤器，新配制的培养液须先做培养试验，确认无污染方可应用。每次操作前半小时打开生物安全柜吹风、紫外线和房间内的紫外灯，操作者应戴口罩和灭菌的手套。操作过程中要严格按无菌操作规范操作。操作完毕后，应将工作台面整理好，并用75%酒精擦拭工作面，关闭生物安全柜。

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支原体检测方法的比较

目前市面上，支原体的检测方法较多，常用的方法有如下几种：

1、观察细胞的形态和生长特征   
     特点：支原体污染比较严重时可出现生长减慢，有的培养基pH明显变酸，并出现细胞病变，其病变特征与病毒感染相似，因此不能准确诊断。

2、分离培养法   
     特点：大多数支原体可出现特有的典型菌落。该方法准确、可靠，但时间长，敏感性不够高。

3、DNA结合荧光素染色法   
     特点：此法简便、价廉，但若细胞片制备不当则结果难以判断。

4、电子显微镜和免疫电子显微镜法   
     特点：此法较准确，但受条件限制，时间长，敏感性不高。

5、间接免疫荧光法和免疫印迹   
     特点：简便、快速、特异性较强强，仍会有荧光背景，影响判读 。

6、PCR技术   
     特点：快速、敏感性高，但若条件控制不当容易出现假阴性和假阳性。

7、发光法检测
     特点：简便—加入试剂检测
           快速—20min
           通用—可检测所有mycoplasma and acholeplasma
           灵敏度高—杰出的检测底线，低于50cfu/ml

8、其他方法   
     放射性核素掺入法、放射自显影法、基因探针法等。

Lonza发光法—MycoAlert®支原体检测试剂盒

支原体的侵染带给研究者许多烦恼，因此对于支原体的监控就变得越来越重要。然而传统的支原体检测方法费时（一天到一周甚至一月），而且准确性不高（假阳性和假阴性较多），故而，Lonza推出的MycoAlert®支原体检测试剂盒，以其简便、快速和灵敏度高等特点，为支原体的检测带来了一场革命性的变化。同时，当发生支原体污染时，MyzoZap®支原体去除试剂可以帮助您去除支原体。

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MycoAlert® 支原体检测原理：

MycoAlert® 试剂盒是一个基于检测支原体酶活的可选择生化试剂盒。正是这种支原体酶的存在提供了一种快速的、高灵敏度的检测样品中支原体污染的程序。支原体被释放出来，在酶和MycoAlert®底物的作用下，催化ADP向ATP的转化。

通过检测加入MycoAlert®底物之前和之后样品中ATP的水平值，两者的比值可以得出支原体是否存在。如果支原体不存在，第二次的检测数值不会高于第一次。如果当底物加入之后支原体酶的活性增加的话，ATP的水平将会提高，检测得到的光值将会加强（图1）。

MycoAlert® 支原体检测试剂盒具有以下特征：

  快速—20分钟内得到结果。
  操作简单—加入试剂，测发光值。
  通用—可检测所有的支原体或者无胆甾原体。
  灵敏度高—杰出的检测底线（低于50cfu/ml），可以避免由于PCR或者荧光染料技术引起的假阴性。

Neg:negtive（阴性） Pos:positive（阳性）
Lonza支原体发光检测法灵敏度高，线性范围广。

MycoAlert® 支原体检测试剂盒所需仪器：
    
MycoAlert® 支原体检测试剂盒需要带有发光模块的仪器进行检测，例如Promega的发光检测仪20/20或者多功能发光仪。    

订货信息：

应用文献：

1. Kunz-Schughart LA, Schroeder JA,Wondrak M, van Rey F, Lehle K,Hofstaedter F, Wheatley DN. Potential of fibroblasts to regulate the formation of threedimensional vessel-like structures from endothelial cells in vitro. Am J Physiol Cell Physiol. 2006 May; 290(5):C1385-98.
2. Lehner M, Bailo M, Stachel D, Roesler W,Parolini O, Holter W. Caspase-8 dependent apoptosis induction in malignant myeloid cells by TLR stimulation in the presence of IFN-alpha. Leuk Res. 2007 Dec;31(12):1729-35.
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4. Lin YG, Kunnumakkara AB, Nair A, Merritt WM, Han LY, Armaiz-Pena GN, Kamat AA, Spannuth WA, Gershenson DM, Lutgendorf SK, Aggarwal BB, Sood AK. Curcumin inhibits tumor growth and angiogenesis in ovarian carcinoma by targeting the nuclear factor-kappaB pathway. Clin Cancer Res. 2007 Jun 1;13(11):3423-30.
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