凋亡聚焦:Caspase检测新品[新品推荐]

【字体: 时间:2012年07月17日 来源:生物通

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  Life Technologies公司近日推出了CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent,以检测凋亡时的Caspase 3/7活性。与其他方法相比,这种试剂的检测要简单得多。只需将经过稀释的检测试剂加入细胞,孵育30分钟,即可观察。Caspase-3⁄7激活的凋亡细胞将有着明亮的绿色细胞核,而未激活细胞的荧光信号极低。

Caspase是一组天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶,它们在凋亡中发挥重要作用。一般来说,哺乳动物的caspase可根据功能分类:细胞因子激活(包括caspases 1、4、5、13);凋亡起始(包括caspases 2、8、9、10)和凋亡执行(包括caspases 3、6、7)。

市场上有很多caspase检测试剂盒,来检测多种caspase的活性。我们既可以通过荧光标记的底物来检测有活性的caspase,也可以利用荧光标记的caspase抑制剂来标记。你还可以通过免疫组化分析来检测切割的底物如PARP。当然,很多公司也有caspase的抗体,但操作流程长,也不能对活细胞进行成像。

为此,Life Technologies公司近日推出了CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent,以检测凋亡时的Caspase 3/7活性。这是一种四个氨基酸的肽段(DEVD),带有核酸结合染料。大家都知道,DEVD肽段是Caspase 3/7的底物。

CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent本身不发荧光,因为DEVD肽段抑制了染料与DNA的结合。然而,当凋亡细胞中的Caspase-3⁄7激活后,DEVD肽段被切割,让染料与DNA结合,并发出明亮的绿色荧光。染料与DNA结合后的发射波长为~530 nm,可利用标准的FITC滤光片观察。

与其他方法相比,这种试剂的检测要简单得多。只需将经过稀释的检测试剂加入细胞,孵育30分钟,即可观察。Caspase-3⁄7激活的凋亡细胞将有着明亮的绿色细胞核,而未激活细胞的荧光信号极低。

这种分析实现了活细胞内Caspase-3⁄7激活的观察。此外,由于检测中无需洗涤步骤,故避免了洗涤所造成的细胞损失。更重要的是,CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent的信号可耐受固定和透化。这允许了后续开展终点分析,或利用免疫细胞化学检测其他目的蛋白。此试剂适用于成像、高内涵分析/筛选、高通量筛选和流式细胞仪。索取资料

传统的凋亡研究大多是在单个时间点进行测定,然而,因为细胞是活体,其生物学和细胞进程是动态而非静态的,故记录细胞应答某些刺激(如药物处理或某种生长因子刺激)时所产生的动态变化可能更为关键。

罗氏应用科学部推出的xCELLigence系统则为凋亡通路的全盘观察打开了大门,让我们能够更深入地了解细胞中究竟发生了什么。xCELLigence是一种无需标记、同时又可对细胞进行实时监测的新型细胞分析平台。它利用检测电子传感器阻抗变化以反映细胞生理状态,从而对细胞进行无损伤地实时定量检测。细胞接种在96微孔E-plate中,在每个孔的底部有嵌入的微电子感应器。使用低电压(20mV)交流电在孔内产生一个离子环境,就能反映出细胞增殖、存活、凋亡、形态变化等细胞生物学状态。索取资料

(生物通 薄荷)

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