iPSC培养tip:Matrigel的包被[心得点评]

【字体: 时间:2012年09月04日 来源:生物通

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  在使用mTeSR™1培养hESC和iPSC时,STEMCELL建议使用BD Matrigel™ hESC-qualified Matrix(货号 354227)来包被平板。在Matrigel基质上,mTeSR™1可用于未分化状态hES细胞的维持和扩增,而不必添加其他生长因子。

对于人胚胎干细胞(hESC)和人诱导多能干细胞(iPSC)的培养和维持,mTeSR™1是目前比较常用的一种胚胎干细胞培养体系。这种培养基配方最初来自WiCell™ 研究所,后由加拿大STEMCELL公司优化,是一种成分确定的无血清培养基。在培养时,它需要使用包被了基质的组织培养板,来支持细胞粘附和扩增。

STEMCELL建议使用BD Matrigel™ hESC-qualified Matrix(货号 354227)来包被平板。在Matrigel基质上,mTeSR™1可用于未分化状态hES细胞的维持和扩增,而不必添加其他生长因子。mTeSR™1和BD Matrigel基质的结合使用可培养各种WiCell™ hES细胞系多至20代,因此mTeSR™1和hES适用的Matrigel基质, 作为优质培养液与表面的结合,创造了一种完全的培养环境以支持hES细胞的无饲养层扩增,为hES培养提供了一种标准化的培养方法。

关于Matrigel的包被,STEMCELL提出了一些建议。首先,Matrigel的稀释应参照BD的产品插页中的介绍。BD根据每个批次的蛋白浓度计算出稀释系数。用户在使用前须查阅批次特异的分析证明书(COA),确定稀释系数。

每块组织培养板必须完全、均匀地包被Matrigel,这一点很重要。在Matrigel未充分包被的地方,细胞不能正常粘附。避免不均匀包被的一种方法是让包被的培养板放在生物安全柜中,盖上盖子(以避免干燥),室温下静置1小时。如果您赶时间,可以将平板在37°C温箱内放置30分钟。确保生物安全柜或温箱搁板是水平的,并避免培养板叠成一摞。

包被后的培养板应存放在2-8°C,最多一星期(由Parafilm™密封,以避免干燥)。确保电冰箱的搁板也是水平的。专家提醒,不建议使用Matrigel包被不均匀的平板,或Matrigel已蒸发的平板。

如果干细胞培养时使用了TeSR™2培养基,则专家建议使用StemAdhere™ Defined Matrix for hPSC进行培养板的包被,而不是Matrigel。这种成分确定的完全培养基是mTeSR™1的升级版,不含血清,不含动物蛋白。

STEMCELL还即将推出一种成分高度确定、无需滋养层细胞(feeder-free)的培养基TeSR™-E8™,它可与玻璃粘连蛋白(vitronectin)共同使用。(生物通 薄荷)

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