主流之选 最新4款定量PCR仪推荐[选购宝典]

【字体: 时间:2013年11月05日 来源:生物通

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  荧光定量PCR技术尽管很成熟,但创新无止境,新仪器仍在不断上市。在过去一年,许多大牌的生物技术公司都推出了最新款的定量PCR仪。下面就让生物通小编带你去看看。

荧光定量PCR(Real-Time PCR)的出现让我们能够确定样品中存在多少特异的DNA序列,而不像普通的终点PCR那样,只知道有还是没有。利用荧光定量PCR,我们能够测定基因表达,检测miRNA丰度,开展基因分型,验证芯片和测序的数据,如此云云。

尽管这两年杀出了个数字PCR,无需标准曲线,灵敏度也更高。然而,对大部分应用而言,qPCR的表现已足够好。使用简单、准确性高、重复性好、动态范围广,更重要的是,价格便宜。除非你面对的是低拷贝数事件,否则,当然是只选对的,不选贵的。

荧光定量PCR技术尽管很成熟,但创新无止境,新仪器仍在不断上市。在过去一年,许多大牌的生物技术公司都推出了最新款的定量PCR仪。下面就让生物通小编带你去看看。

直观易用

过去的老款qPCR仪,屏幕小,按键多,设置个运行程序,按来按去搞不定。在如今这个手机比脸大的时代,这样的仪器显然不能满足我们的要求。直观易用才是王道。对仪器而言,最好是即拆即用,无需光路校正,也无需培训。软件同样要直观,方便程序的设置和保存。

LightCycler® 96实时荧光定量PCR仪是罗氏LightCycler家族的最新成员。它提供了直观友好的用户界面,无论你是初出茅庐的qPCR新手,还是久经沙场的实验达人,都能一目了然,无师自通。对于初次使用的用户来说,常规的基因表达和遗传变异研究的实验设置都变得易如反掌;对于qPCR实验操作熟练的用户,分析软件能直接输出经过严谨计算分析、符合国际文章发布要求的数据结果。

据介绍,这款仪器选用了以往仅在高端平台上应用的银质模块温控技术,保证了仪器拥有优秀的温度均一性,因此产生的数据也具有非常高的均一性。此外,它还采用长寿命的全波长白色固态光源,配合使用2×96根等距玻璃光纤,从96个样本孔中同时激发及捕获荧光信号,使得用户彻底告别普通qPCR仪器检测的边缘效应。

不久前,罗氏发布了针对LightCycler 96的软件升级,增加了高分辨率熔解分析和定量基因检测模块。HRM分析实现了已知和未知基因突变的快速检测,包括单核苷酸多态性(SNP)、缺失和甲基化区域。而新的定量检测模块实现了目的基因存在或缺失的直接检测和验证。这一模块采用新颖的控制概念,特别适合传染病研究领域的用户。

温度均一

在选购仪器时,我们自然会关心它是否能产生高质量、重复的数据。这时,我们有必要考虑一些具体的参数,如温度均一性。各孔之间不均匀的温度会导致数据不一致,因为小的温度差异也会影响引物退火和荧光信号。

PikoReal荧光定量PCR仪由赛默飞世尔科技推出,是一款真正五通道的定量PCR仪。它采用五波长LED光源整板激发,高灵敏度CCD整板检测,稳定、高效。而蜂巢式样品槽配合专利的放射状散热片设计,确保整个PCR模块能在1秒内实现温度均一稳定。PikoReal的升温速率高达5°C/s,降温速率达4.5°C/s,这使得PCR反应速度得以大幅度提高。

值得一提的是,这款仪器采用四分之一块384孔PCR板大小的96孔板作为反应容器。而半导体和热盖均比样品模块大很多,在样品模块周边形成一个缓冲空间,有效防止边缘冷凝,因此反应体系低至5 μl时重复性也很好,大大节省了试剂。同时,由于样品模块的缩小,整台仪器的体积也可大幅缩小(30x23 cm),不仅节省实验台的空间,也更加经济环保。索取PikoReal荧光定量PCR仪的详细资料


使用灵活

与其他许多实验室仪器一样,定量PCR仪必须足够灵活,才能满足实验室不断增长的需求。虽说96孔板是当今很多实验室的标配,但随着时间的推移,很难说你不会上升到384孔板或数字PCR。Life Technologies的QuantStudio™仪器家族就很好地满足了这方面的需求。

QuantStudio™ 7 Flex和QuantStudio™ 6 Flex实时定量PCR系统是今年夏天上市的新品。QuantStudio™ 7 Flex带来了出色的灵活性,容纳四个可互换的模块(96孔、96孔快速、384孔或TaqMan Array Card)。仪器自带一种模块类型,其他模块可单独购买。此外,Life Tech还提供Twister® Robot自动化配件,以支持高通量的应用。该仪器特有6色通道和21种滤光片,适合多重分析应用。它能够在单重反应中检测低至1.5倍的变化,并获得10个数量级的动态范围。

若你暂时不需要支持TaqMan Array Card,那么有个更经济实惠的选择——QuantStudio™ 6 Flex。它支持三个可互换的模块(96孔标准、96孔快速或384孔),满足中等通量的需求。随着大型研究的性能要求不断提高,该仪器也能升级到QuantStudio™ 7 Flex,而只需购买一个试剂盒。

若你需要终极的灵活性,QuantStudio™ 12K Flex则是不二之选。它在7 Flex的基础上,还支持OpenArray®芯片模块。系统可同时运行4块OpenArray® 芯片,相当于32块传统的384孔板。这样,只需4小时,你就能获得高达12,000个数据点。索取QuantStudio仪器的详细资料

超大容量

对于开展样品制备应用的研究人员而言,50 µl的反应体积可能无法满足他们的要求。例如,新一代测序的emulsion PCR和芯片的文库扩增需要更多的样品量。为此,Bio-Rad推出了深孔板定量PCR仪——CFX96 Touch Deep Well™,让反应体积增加至125 µl。

此系统利用Bio-Rad的固态光学技术,可准确分辨单个反应孔中最多五个目标,实现了精确定量。光学系统扫描每块板的正上方,高灵敏度地检测每个孔,且无色度亮度干扰(crosstalk)。

除了行业领先的光学技术,系统还通过Bio-Rad专利的加热模块,为大体积反应带来了出色的热性能和均一性。这种模块比标准模块更快速地加热和冷却,因此平均升降温速率提高,而总的运行时间缩短。系统还包含一个内置的温度梯度,便于在单次反应中优化条件。

当然,购买仪器不止是看参数,我们还要考虑售后服务等因素,毕竟定量PCR仪价格不菲。因此,在选购仪器时,我们也要留心一下质保条款,保修期多久,过了保修期,零件与人工如何收费,再结合我们平时购买产品时所享受的服务质量,大家估计也心中有数了吧。(生物通 余亮)

产品名 LightCycler® 96 PikoReal  CFX96 Touch Deep Well
制造商 罗氏诊断 赛默飞世尔 Bio-Rad
模块类型 纯银质模块,96孔,开放体系 24 96 Peltier96
光路 2*96根等距光纤,固定光路 五组二分镜,反射镜  请咨询厂家 
推荐样品容量 10-50 μl 5–50 μl24孔),5–20 μl96孔) 10-125 μl
升温速率 4.4°C/sec >5°C/sec 2.5°C/sec
降温速率 2.2°C/sec > 4.5°C/sec 2.5°C/sec
温控范围 37-98°C 4–99.9°C 0-100°C
温度精确性 ±0.2°C ±0.2°C ±0.2°C
温度均一性 ±0.2°C ±0.3°C95°C时),±0.2°C72°C时),±0.15°C60°C时) ±0.4°C well-to-well within 10 sec of arrival at 90°C
激发光源 高强度白光LED 五个不同波长LED LED
检测器 CCD CCD 光电二极管
激发/检测波长范围 470-645nm(激发),514-697nm(检测) 475–640 nm(激发),520–740 nm(检测) 450-730 nm
线性范围 10个数量级 10个数量级 10个数量级
检测灵敏度 单拷贝 单拷贝 单拷贝
多重能力 4 4 最多5个目标
温度梯度
数据分析 绝对定量
相对定量
熔解曲线分析
基因分型
高分辨率熔解曲线分析(
HRM

定量检测
绝对定量
相对定量
熔解曲线分析
高分辨率熔解曲线分析(
HRM

等位基因分析
绝对定量
相对定量
熔解曲线分析
基因表达分析
等位基因分析

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