梅约诊所如何开展exosome研究[创新技巧]

【字体: 时间:2013年11月22日 来源:生物通

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  exosome如今是个热门的话题。这种直径约为30-150 nm的小囊泡天然存在于所有体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳,且其蛋白、RNA和脂肪成分特异,因此,exosome有望在多种疾病的早期诊断中发挥作用。如何开展exosome的研究?我想这是大家都感兴趣的。那就让我们来看看著名的梅约诊所(Mayo Clinic)是怎样做的。

exosome如今是个热门的话题。这种直径约为30-150 nm的小囊泡天然存在于所有体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳,且其蛋白、RNA和脂肪成分特异,因此,exosome有望在多种疾病的早期诊断中发挥作用。如何开展exosome的研究?我想这是大家都感兴趣的。那就让我们来看看著名的梅约诊所(Mayo Clinic)是怎样做的。

梅约诊所的Gregory Gores博士主要开展肝脏疾病的基础研究。他所感兴趣的领域之一是脂毒性及其在非酒精性脂肪性肝病发展中的作用。研究小组提出假说,认为脂毒性诱导肝脏细胞释放囊泡(exosome和小囊泡)。他们推测,这些细胞外囊泡参与了免疫细胞的招募和激活,导致肝脏炎症。

Gores博士的小组需要精确测定样品中细胞外囊泡的大小分布和数量。之前,他们使用扫描电镜来观察和测定颗粒大小,并通过吸光度来测定蛋白含量,但发现这种方法不大准确。于是,他们选择了NanoSight的纳米颗粒追踪分析(NTA)技术。有了这一技术,他们能够在分离后立即分析囊泡,并在同一天内将指定浓度的囊泡用于后续实验。

在实验过程中,他们使用的是NS300纳米颗粒分析仪。此款仪器能够测定大小在10-2000 nm的悬浮颗粒,满足广泛的应用需求,包括蛋白聚集、exosome和囊泡研究、药物运输,也特别适合以荧光量子点标记的颗粒分析。

这个最新款的NanoSight仪器提供了多方面的分析。它配备一个能同时放置六块荧光滤片的机动滤光轮,并具有流变特征,可测定在0-5 cP范围内的粘度。它还配有高灵敏度的CMOS摄像头、温度控制,以及激光块的选择。它外形小巧,占地仅为40 cm长和25 cm宽,适合那些空间有限的实验室。

在谈及NS300纳米颗粒分析仪时,研究员Petra Hirsova博士谈道:“能够实时地看到、计数并测定颗粒的大小,这相对于我们使用过的其他技术已经是很大的优势。与扫描电镜相比,NTA制备样品和获得结果要更轻松、更快速。与测定囊泡总蛋白的技术相比,NTA带来了细胞外囊泡的更精确评估。”

NanoSight是一家私营公司,总部设在英国。它已在全球范围内出售了500多台仪器,其客户包括葛兰素史克、诺华、辉瑞、宝洁、联合利华等,以及最知名的大学和研究所。截至目前,NanoSight的技术已被900多篇第三方文献引用。在今年9月,NanoSight被思百吉集团所收购。(生物通 薄荷)

 

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