如何检测H7N9禽流感病毒

【字体: 时间:2013年04月07日 来源:生物通

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  尽管H7N9病毒感染人类的情况是首次出现,但国家及省市疾控中心在经历了SARS、H1N1等疫情之后,已经积累了丰富的经验。4月3日,国家卫生和计划生育委员会制定并发布了《人感染H7N9禽流感疫情防控方案(第一版)》,指导各地开展人感染H7N9禽流感疫情防控工作。

  

这个春天,禽流感再度来袭。截至昨晚(6日)17时,全国共报告18例人感染H7N9禽流感确诊病例,6人死亡。目前疫情处于散发状态,还没有发现人传人,所有病例的密切接触者都已采取医学观察措施,未发现异常情况。

根据世界卫生组织的介绍,流感的H7病毒通常是一组在鸟类中传播的流感病毒。流感病毒(H7N9)属于H7病毒大类下的一个亚群。虽然偶尔会有某些H7病毒(H7N2、H7N3、H7N7)感染人类的报告,但过去没有人类感染H7N9病毒的报告,直到中国最近报告出现了这种病例。

尽管H7N9病毒感染人类的情况是首次出现,但国家及省市疾控中心在经历了SARS、H1N1等疫情之后,已经积累了丰富的经验。4月3日,国家卫生和计划生育委员会制定并发布了《人感染H7N9禽流感疫情防控方案(第一版)》,指导各地开展人感染H7N9禽流感疫情防控工作。

根据这一防控方案,各级医疗机构发现可疑病例之后将实时上报,疾控人员会第一时间赶往现场,采集患者“标本”并运回实验室检测。实验室的病原学检测主要包括两方面:

1. 核酸检测。对患者呼吸道标本(如鼻咽分泌物、口腔含漱液、气管吸出物或呼吸道上皮细胞)采用real time PCR(或RT-PCR)检测到H7N9禽流感病毒核酸。
2. 病毒分离。从患者呼吸道标本中分离H7N9禽流感病毒。

目前,国家疾控中心已经开发出检测H7N9的引物和探针,并分配到各省市的疾控中心。配合核酸提取试剂盒以及一步法RT-PCR试剂盒,可在3-5小时内获得结果。

据有关人士介绍,疾控中心在提取流感病毒的RNA时,主要使用的是QIAGEN公司的QIAamp Viral RNA Mini Kit(货号52904和52906)。此试剂盒使用快速离心或真空操作,简化从多种类型样本中纯化病毒RNA的操作流程,无需苯酚-氯仿抽提。病毒RNA特异性结合到QIAamp硅胶膜上,污染物流出。通过两步高效洗涤完全去除二价阳离子和蛋白质等PCR抑制物,再用水或试剂盒中的缓冲液洗脱结合在离心柱上的病毒DNA。

对于病毒的实时定量PCR检测,疾控中心则大多使用Life Technologies公司的Ambion AgPath-ID One-Step RT-PCR Kit。据Life Tech介绍,此试剂盒的特点是:1)高灵敏,高特异的稳定的RNA病源RT-PCR检测试剂盒;2)简便快速,1小时内可以获得检测结果;3)组分很少,反应组装方便。

据介绍,在同一块反应板进行样本筛查时,不光要进行H7N9的检测,还要检测H1N1、H3N2等七八种病毒。扩增结束后,操作人员通过电脑读取曲线,验证病毒为阴性还是阳性。为保证检测质量,需要至少两人同时操作。

点击下载QIAGEN公司H7N9检测方案>>

(生物通 余亮)

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