NanoDrop 8000分光光度计之使用体会[心得点评]

【字体: 时间:2013年08月20日 来源:生物通

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  一说起分光光度计,大家肯定会想到NanoDrop。这款小巧的仪器让我们从繁琐的样品稀释和比色杯清洗中解放出来,大大简化了DNA、RNA和蛋白的检测。NanoDrop 8000是能够同时测定8个样品的全光谱紫外-可见光分光光度计。如果你们实验室需要高通量检测,则不妨听听其他用户怎么说。

一说起分光光度计,大家肯定会想到NanoDrop。这款小巧的仪器让我们从繁琐的样品稀释和比色杯清洗中解放出来,大大简化了DNA、RNA和蛋白的检测。NanoDrop 8000是能够同时测定8个样品的全光谱紫外-可见光分光光度计。如果你们实验室需要高通量检测,则不妨听听其他用户怎么说。

Hugo Hilton是斯坦福大学的一名博士后。他们实验室研究的是先天免疫系统的多样性如何影响免疫系统的功能。具体来说,他们研究NK细胞受体的多样性如何改变NK细胞功能。这种受体被称为杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)。

他们利用昆虫表达系统来生产重组蛋白,用于无细胞的结合分析。在实验操作中,他们需要将目的基因与线性化的杆状病毒混合,共同转染Sf9昆虫细胞。具体用量是2ug目的基因DNA和0.2ug杆状病毒。考虑到每次转染20个样品,他们在定量时选择了NanoDrop 8000。

基因文库被克隆到大肠杆菌载体上。经过转化和扩增,他们提取出重组DNA并测序。之后利用NanoDrop测定每个样品的浓度。Hilton提到,第一次启动NanoDrop时,应用蒸馏水清洁仪器并用滤纸吸干。随后利用PCR级别的水做空白对照。在测定多个样品的浓度时,他们使用多通道移液器将DNA样品转移到NanoDrop的一排基座上。仪器快速测定每个DNA样品的浓度(大约10秒),并提供A260/A280比例,反映样品纯度。

Hilton认为,NanoDrop能够快速准确地测定核酸浓度。他们曾经用浓度已知的样品来确定仪器的准确性。同一样品多次测量之间的差异也很小。此外,他还提到,用户友好的软件可操控仪器,并记录和保存多个样品的浓度(最多96个)。A260/A280比例实现了每个样品纯度的同时测定。仪器的启动时间极短,不过,当天的第一个用户需要做空白对照。另外,8通道让用户能够快速测定多个样品的浓度。

Hilton还提到,NanoDrop 8000需要每六个月进行一次校准检查,以确保测量结果准确。

当然,若你们实验室的样品不多,则可以选择经典的NanoDrop 2000/2000c或体积更小巧的NanoDrop Lite。这个只有手掌大小的迷你型超微量检测系统(16cm x 11.5cm),延续NanoDrop专利技术,只需1ul样品,不需比色皿,自动、快速、准确、可重复,适合放在任何的实验台面上。(生物通 余亮)

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