培养原代神经细胞的建议与忠告[心得点评]

【字体: 时间:2014年11月05日 来源:生物通

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  长期培养原代神经元,这可不是件容易的事。它不仅需要出色的细胞培养技术,也需要培养基、无血清添加剂和基质的最佳组合。密切关注这些培养条件,才能确保原代神经元的存活。在此,GlobalStem公司的专家Roberta Harvey就与我们分享了一些神经细胞培养的建议和技巧。

原代神经元被广泛用于突触功能、形态、神经毒性和神经递质释放等研究。它们让研究人员能够更深入地探索神经活动。然而,神经元也是出名的难搞。在培养神经网络时,一个最大的问题是生存期短。然而,观察整个网络的活动往往需要几个星期到几个月,这让延长神经寿命显得极为重要。

长期培养原代神经元,这可不是件容易的事。它不仅需要出色的细胞培养技术,也需要培养基、无血清添加剂和基质的最佳组合。密切关注这些培养条件,才能确保原代神经元的存活。在此,GlobalStem公司的专家Roberta Harvey就与我们分享了一些神经细胞培养的建议和技巧。

Q & A

Q1:当我在96或384孔板中培养原代神经元时,外圈孔中的培养基比内部孔要低得多。我怎样才能避免这种情况?

A:在96或384孔板铺板时,外圈孔可能会存在蒸发,导致边缘效应和实验结果不一致。一种减少边缘效应的方法是使用氟化乙烯丙烯膜(如FEP Teflon® R Film)。这种薄膜放在盖子和板之间,可透过氧气,但没有孔,从而保留了水蒸气,并阻挡微生物。

Q2:我试图培养原代神经元超过14天,但接近21天时,它们就开始死了。我该如何增强它们的长期生存能力?

A:在长期培养过程中,原代神经元须获得适当的营养成分。一个建议是每3-4天进行一半的培养基更换,以避免养分损失。如果还是不行,请检查您的添加剂。神经元的无血清培养需要使用限定的添加剂,不过这些产品在支持生长的能力上差别很大。GlobalStem GS21是一种限定的添加剂,可改善原代神经元的长期生存能力,同时确保批次之间的一致性。

Q3:在培养两周后,我的原代神经元开始脱离。我检查了所有试剂,似乎都没有问题。我使用了多聚L-赖氨酸让细胞附着。这会是什么问题呢?

A:在培养细胞时,形态、分化、附着和生长都受到生长基质类型的影响。神经元需要一些适当的东西让细胞附着。中枢神经系统(CNS)神经元往往在多聚鸟氨酸或多聚赖氨酸及层粘连蛋白下附着地很好。在使用多聚L-赖氨酸时,可以试试看更高分子量的配方,因为聚合物越短,对神经元的毒性越大,这可能导致它们脱离。

技巧 & 经验

1. 了解培养条件对维持神经元的健康至关重要。与您的操作流程一致,建立一个时时遵守的详细方案。

2. 维持一致的细胞密度和健康,避免边缘效应。在铺板后,将细胞在室温下静置30分钟,避免振摇,给它们时间来适应自己的环境。细胞密度的差异可能导致细胞成熟的变化。

3. 神经元对环境变化非常敏感。在铺板后,尽量少打搅它们,除了更换培养基。任何晃动或移动可能影响神经元的长期生长,导致培养数据发生变化。

(生物通 薄荷)

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