培养原代神经细胞的建议与忠告[心得点评]

原代神经元被广泛用于突触功能、形态、神经毒性和神经递质释放等研究。它们让研究人员能够更深入地探索神经活动。然而，神经元也是出名的难搞。在培养神经网络时，一个最大的问题是生存期短。然而，观察整个网络的活动往往需要几个星期到几个月，这让延长神经寿命显得极为重要。

长期培养原代神经元，这可不是件容易的事。它不仅需要出色的细胞培养技术，也需要培养基、无血清添加剂和基质的最佳组合。密切关注这些培养条件，才能确保原代神经元的存活。在此，GlobalStem公司的专家Roberta Harvey就与我们分享了一些神经细胞培养的建议和技巧。

Q & A

Q1：当我在96或384孔板中培养原代神经元时，外圈孔中的培养基比内部孔要低得多。我怎样才能避免这种情况？

A：在96或384孔板铺板时，外圈孔可能会存在蒸发，导致边缘效应和实验结果不一致。一种减少边缘效应的方法是使用氟化乙烯丙烯膜（如FEP Teflon® R Film）。这种薄膜放在盖子和板之间，可透过氧气，但没有孔，从而保留了水蒸气，并阻挡微生物。

Q2：我试图培养原代神经元超过14天，但接近21天时，它们就开始死了。我该如何增强它们的长期生存能力？

A：在长期培养过程中，原代神经元须获得适当的营养成分。一个建议是每3-4天进行一半的培养基更换，以避免养分损失。如果还是不行，请检查您的添加剂。神经元的无血清培养需要使用限定的添加剂，不过这些产品在支持生长的能力上差别很大。GlobalStem GS21是一种限定的添加剂，可改善原代神经元的长期生存能力，同时确保批次之间的一致性。

Q3：在培养两周后，我的原代神经元开始脱离。我检查了所有试剂，似乎都没有问题。我使用了多聚L-赖氨酸让细胞附着。这会是什么问题呢？

A：在培养细胞时，形态、分化、附着和生长都受到生长基质类型的影响。神经元需要一些适当的东西让细胞附着。中枢神经系统（CNS）神经元往往在多聚鸟氨酸或多聚赖氨酸及层粘连蛋白下附着地很好。在使用多聚L-赖氨酸时，可以试试看更高分子量的配方，因为聚合物越短，对神经元的毒性越大，这可能导致它们脱离。

技巧 & 经验

1. 了解培养条件对维持神经元的健康至关重要。与您的操作流程一致，建立一个时时遵守的详细方案。

2. 维持一致的细胞密度和健康，避免边缘效应。在铺板后，将细胞在室温下静置30分钟，避免振摇，给它们时间来适应自己的环境。细胞密度的差异可能导致细胞成熟的变化。

3. 神经元对环境变化非常敏感。在铺板后，尽量少打搅它们，除了更换培养基。任何晃动或移动可能影响神经元的长期生长，导致培养数据发生变化。

（生物通 薄荷）