牙髓干细胞研究的*佳“助推器”

----基因公司细胞研究完整解决方案

牙髓干细胞是牙髓组织中具有高度增殖、自我更新能力并可多向分化的一类成体干细胞，在牙髓修复和牙齿再生以及骨组织工程相关研究中发挥重要作用。龙沙（LONZA）作为细胞培养领域的业界翘楚，可为研究者提供牙髓干细胞研究的完整解决方案。

干细胞是一类具有自我更新、高度增生能力和多相分化潜能的细胞，能够产生高度分化的功能细胞，包括胚胎干细胞和成体干细胞。目前已在体外成功地扩增出人体多种组织的成体干细胞，Gronthos等在2000年发现人牙髓组织中同样存在成体干细胞，即牙髓干细胞(dentalpulpstemcells,DPSCs)。他们应用酶消化法对成人第三磨牙牙髓细胞进行体外培养，并与骨髓基质干细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)进行比较。结果表明，这两种细胞具有相似的免疫表型，但使用牙髓细胞培养得到的这群细胞具有更高的克隆形成率和增生率，经体外诱导后能形成分散而高密度的钙化小节。由此提出了DPSCs的概念，并把这群具有克隆形成能力的高增殖率的牙髓细胞命名为DPSCs。

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牙髓干细胞存在于牙髓血管周边微环境中，具有高度增殖、自我更新的能力和多向分化的潜能。随着组织工程学的不断进展，牙髓干细胞可在特定刺激诱导下分化成脂肪细胞、软骨细胞、神经元细胞等多个亚系的前体细胞，在临床应用中可实现组织和器官的再造,具有广阔的应用前景。

龙沙（LONZA）作为细胞培养领域的业界翘楚，可为研究者提供从牙髓干细胞（Poietics™ Human Dental Pulp Stem Cells）到配套培养基（DPSC BulletKit™ Medium），以及后续功能研究中用到的核转染系列产品。

Poietics™ Human Dental Pulp Stem Cells（货号：PT-5025）由成人供者的第三磨牙分离得到，每管包含106个细胞，在使用LONZA提供的DPSC配套培养基的条件下活性可达70%以上，同时保证扩增5代，即至少10个群体倍增。

图1. Dental pulp stem cells stained for dentin sialophosphoprotein (DSPP) (red) and  DAPI (blue)

LONZA同时提供与DPSC配套的培养基DPSC Growth Medium BulletKit™ （货号：PT-3005），其中包含了基础培养基DPSC Basal Medium（货号：PT-3927）和生长因子等补充成分DPSC SingleQuot™ Kit（货号：PT-4516）。LONZA的科研人员已经对该培养基应用于DPSC的培养条件进行了优化，便于研究者将更多的精力投入到后续的功能研究中。

产品名称	描述	货号
DPSC BulletKit™ Medium	包含500 ml DPSC Basal Medium 和SingleQuots™ Kit	PT-3005
DPSC Basal Medium	牙髓干细胞基础培养基 (500 ml)	PT-3927
DPSC SingleQuots™ Kit	与DPSC Basal Medium形成DPSC生长培养基; 包含  DPSCGS, 50 ml; L-glutamine, 10.0 ml; Ascorbic Acid, 5.0 ml; GA, 0.5 ml.	PT-4516

Nucleofector™技术是LONZA公司的专利创新技术，利用传统的电穿孔技术配合高效率细胞转染液，通过预置的优化好的转染程序，直接把外源基因导入目标细胞的细胞核和细胞质中。与传统的电穿孔仪相比，对于原代细胞、干细胞以及难转染的细胞系等较难转染的哺乳动物细胞，Nucleofector™技术的转染效率更高、细胞存活率更好，最高转染效率可达99%。由于外源基因直接入核，所以外源基因的表达不依赖细胞的分裂，最快在转染2小时后就能观察到转染进去的基因的蛋白表达。

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LONZA拥有一个全球共享的，针对1000多种细胞的转染操作的数据库，包括细胞处理、转染效率、存活率等各方面验证方案，全球共享，并在不断的更新完善。细胞库中有686种细胞的信息可供检索，已有6000多篇的发表文献，并有针对不同细胞进行优化的protocol。

图2. 使用细胞特异性的核转染试剂盒转染质粒eGFP或eYFP入不同来源的神经细胞和胶质细胞（J.Kohler，R.Klein，MPI for Neurobiology，Munich，Germany），转染24-72小时后，通过荧光显微镜或流式的方法检测转染效率。

另外，LONZA还可为研究者提供内毒素检测试剂、支原体检测及去除试剂、细胞增殖检测试剂等产品。
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