StepOnePlus定量PCR仪之使用心得[心得点评]

【字体: 时间:2014年04月18日 来源:生物通

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  StepOnePlus™ 实时荧光定量PCR系统是Life Technologies(原ABI)推出的一款96孔实时荧光定量PCR仪。它采用基于LED的长寿命四色光学系统,可提供精确的荧光定量PCR结果,无论是新手,还是经验丰富的用户,均可使用。近日,宾夕法尼亚州立大学的Rebecca Crouse谈了谈她的使用心得。

StepOnePlus™ 实时荧光定量PCR系统是Life Technologies(原ABI)推出的一款96孔实时荧光定量PCR仪。它采用基于LED的长寿命四色光学系统,可提供精确的荧光定量PCR结果,无论是新手,还是经验丰富的用户,均可使用。近日,宾夕法尼亚州立大学的Rebecca Crouse谈了谈她的使用心得。

她们实验室主要研究的是气质或性格与生理和健康的相关性。换句话说,也就是在面对挑战时,个体的行为和生理反应有何差异,以及这如何影响个体的疾病易感性和衰老速度。她们在大部分研究工作中使用动物模型,并研究大脑中的基因表达水平如何随不同行为而上调或下调。

她们之所以选择StepOnePlus,是因为Life Technologies的产品质量好,简单易用,技术人员有很大帮助,且软件程序丰富多彩,不过价格也很贵。

在实验过程中,她们采用TRI试剂来匀浆啮齿类动物的大脑组织,随后提取RNA,逆转录成cDNA。之后利用TaqMan分析组分,对几个感兴趣的基因开展qPCR分析,其中看家基因β-actin作为对照。

Crouse并没有贴出具体的实验结果,但大致介绍了一下。她们在分析中采用相对定量(△△Ct)法。首先通过样品中目的基因的平均Ct值减去看家基因的平均Ct值,获得△Ct,再将实验样品的△Ct 减去对照样品的△Ct,而获得△△Ct,最后通过2-△△Ct 计算表达水平。

Crouse认为,如果你在一块反应板上运行整个实验,则StepOnePlus为你完成所有计算。当然,如果你使用多块反应板,你只能从软件中获得△Ct,并手动计算。

她认为,这台仪器使用简单,结果很好,如果价格能承受的话,是个不错的选择。不过,她也发现软件有时会傻傻的。例如,运行开始后若主屏幕上出现一个带感叹号的三角形,则要立即停止运行。如果你继续运行,将无法在运行结束后收集结果。打开模板,将文件重命名,通常能解决这个问题。这种情况很少发生,而她们也一直没找到原因。

另外,Crouse还提到了一些定量PCR实验的建议。试剂盒建议在暗处的冰上准备反应,但她认为没必要。探针不应该长时间暴露在强光下,但制备一块反应板的时间还不足以影响产品。在第一次收到探针时就将其分装,以避免反复冻融。同时,master mix的保质期很短,通常只有6个月,而且很贵,所以一次不要订购太多。(生物通 薄荷)

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