优质足量的Exosome可用超滤法轻松制备

不用超离，不用试剂盒

Exosome（外泌体）是来源于膜的纳米级囊泡，直径在30至150 nm，它们是在正常和病理条件下由许多类型的细胞释放的。exosome对细胞功能的影响已经与各种生理过程相关联，包括：细胞间通讯、癌症转移、免疫调节活性以及传染物（如朊病毒和逆转录病毒）的传播。鉴于这种广泛的潜在相互作用，并考虑到这些纳米级囊泡包含原先细胞的RNA、microRNA和蛋白质，exosome代表了生物标志物发现的一个新兴靶点。

自2007年Valadi等发现细胞分泌的外泌体中含有生物学活性的mRNA、microRNA以来，研究人员对外泌体的研究热情激增。但作为研究的第一步，“制备外泌体”却一直是个不小的挑战。目前，exosome分离的金标准方法是差速超速离心。然而，这种方法需要特殊的仪器，漫长而费力。此后多家公司开发了沉淀法制备试剂盒，但通病是杂蛋白污染明显。2013年以后，很多研究者尝试借助超滤膜及相关产品，通过非常简便的操作，并经电镜检查、WB检测，确定由细胞培养上清并临床样品制备了优质足量的外泌体。2015年4月综述Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma评论了现有的各种exosome制备方法，认为超滤较密度梯度离心更有效，是替代超速离心的最好方案。

超滤方法纯化

Amicon® Ultra-15 超滤管（10 kDa MWCO）

• 用Steriflip® 真空抽滤对样品进行澄清（目录号 SCGP00525；0.22 μm Millipore Express PLUS（PES）膜）。
• 用PBS平衡Amicon® Ultra-15超滤管（目录号 UFC901024，10 kDa MWCO），离心4000g x 10 min。
• 从超滤管内管及收集管吸走PBS。
• 向超滤管加入15 mL样品。
• 4000g离心30 min浓缩。
• 倒空收集管。
• 加入14 mL PBS进行缓冲液置换，温柔吸打样品数次。4000g离心30 min。
• 从浓缩管吸回处理好的样品。（30x 浓缩）

注意：所有Amicon® Ultra-15超滤管（0.5、2.4和15 mL）与此操作流程兼容。

不同方法制备外泌小体产量比较

详细操作和数据备索（电话400-889-1988-2分机）

除了15mL以内的样品用Amicon Ultra超滤管，还有研究者建立了适合200mL及更大体积样品制备exosome的方法（文章备索），由Stirred cell氮气加压搅拌式超滤杯仅需1个小时，产物符合外泌体的各项指标特征。文章并评论，搅拌式超滤的温和浓缩、除盐/换液，对于大的蛋白或“颗粒”，比离心法更有利。

更多exosome制备详细操作步骤，及相关微滤、快速细胞精确计数及Western Blotting检测等技术和产品，请联系默克密理博技术支持中心：电话400-889-1988-2分机。

了解有关exosome制备的详细操作和产品信息

参考文献：

旋转超滤：一种提取细胞外泌体的新方法

A fast, effective, alternative method for exosome isolation from cell culture media