一步法克隆,最快只需15分钟[新品推荐]

【字体: 时间:2015年03月25日 来源:生物通

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  一提到克隆,大家脑海中首先浮现的肯定是酶切、连接。其实,克隆的方法还有很多,比如NEB的一步法克隆。NEB近日推出了NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix,最快能在15分钟内完成多个片段的组装,而无论DNA片段长度如何及末端是否匹配。

一提到克隆,大家脑海中首先浮现的肯定是酶切、连接。其实,克隆的方法还有很多,比如NEB的一步法克隆。NEB近日推出了NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix,最快能在15分钟内完成多个片段的组装,而无论DNA片段长度如何及末端是否匹配。

这种预混液由不同酶混合而成,协同作用于同一缓冲液中,使克隆多片段 DNA 变得更加简单方便。其中,核酸外切酶产生单链3’突出端,促进互补片段的退火;聚合酶填补每个退火片段中的缺口;而DNA连接酶则连接切刻。这种方法既能连接单链寡聚核苷酸,也能克隆携带有不同长度重叠区域(15-80 bp)的双链DNA片段。短至100 bp、长至19 kb的DNA片段都能组装。

与NEB之前推出的Gibson Assembly Master Mix相比,新产品在性能上更优越。这表现在:克隆后保真度高、正确率高,而无需反复筛选、测序;DNA 片段连接效率高,无论起始量更低还是片段更长;可连续克隆,无需考虑片段末端内切酶位点是否匹配。这种方法可用于快速构建DNA片段,用合成的单链DNA寡聚核苷酸桥式连接两个双链DNA片段,如接头插入。此外,商业机构在使用NEBuilder HiFi时无需缴纳授权费。

这一体系既可以实现快速无误的标准克隆,也可以用于多个片段的DNA组装。操作流程更简便,而克隆后的DNA无需纯化就可直接用于转化和作为 PCR、RCA 模板。有了NEBuilder HiFi,您可以轻松地同时进行多种DNA操作,包括定点突变。

此外,NEB还提供了一种免费工具,名为NEBuilder® Assembly Tool(nebuilder.neb.com),以简化引物的设计。由于片段的兼容性,使用其他无缝克隆方法的研究人员也能轻松使用NEBuilder HiFi 来组装。

更多NEB产品及促销信息,请看最新一期的《NEB News》。(生物通 余亮)

欢迎索取NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix的更多资料

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