植物直接PCR技术

【字体：大中小】 时间：2016年11月25日 来源：百泰克

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　　对于植物而言，愿望是美好的，现实是残酷的。植物组织富含多糖、多酚和蛋白等物质，很有可能抑制PCR反应,这该如何是好呢？不用担心，百泰克最新推出植物直接PCR试剂盒，该试剂盒不需要液氮和研磨杵研磨，也不需要钢珠破碎，更不借助任何特殊的仪器设备，方法及其方便快捷。

PCR（Polymerase Chain Reaction）——聚合酶链式反应发明到现在已有30多年，经过世界范围内无数学者的不断补充完善，PCR技术已经成为整个生命科学领域应用最广泛、使用频率最高也是最重要的基础研究手段，在此基础上Touch Down PCR、RT-PCR、Real-Time PCR、Multi PCR等以及最新出现的 Digital PCR等衍生的PCR技术极大的丰富了广大科研工作者的研究手段，大大加速了现代生命科学特别是分子生物学的发展进程，为整个人类对生命与自然的研究做出了巨大贡献。

众所周知，在正向遗传学的基因定位，植物品质和品种鉴定，或者是植物有效成分检测，以及转基因检测等，其后续实验都需要经过PCR实验，然而传统PCR技术以及在此基础上衍生出来的各项新技术新应用，都有一个前提，就是需要事先获得高纯度的核酸模版，尤其是在基因图位克隆中，需要构建一个大的群体（少则几千株，多则上万株），其主要步骤是先提取核酸，然后PCR方法筛选性状的连锁标记（SSR，RAPD等），最后测序克隆基因。传统方法在DNA提取中，都要液氮研磨样品，然后氯仿抽提，最后再PCR。上千株系DNA的提取就需要几周的时间。

核酸纯化的原始目的是为了去除可能干扰后继反应的杂质，对于PCR技术来说，若是能跳过这一步，直接利用样本进行PCR，那不仅能省钱省力，还能避免交叉污染的风险。传统分离提取技术由于要使用一些毒性较强的化学试剂，长期接触，将对操作人员的身体造成不可逆的伤害，甚至在实验过程中造成直接的损害。酚氯仿等化学试剂已经被证明是实验室重要致癌物质，在植物组织核酸分离提取过程中使用的液氮则由于其超低的温度，在实验过程中对操作人员的安全形成了较大威胁。

由于现在的DNA聚合酶性能已经越来越强大，实验室之间早已流传着各种直接用样品进行PCR的小技巧，不过大多只限于哺乳动物细胞或者细菌类，比如在做基因克隆时，通常需要对转化后的单菌落进行鉴定，目前比较便捷的做法是将划线后的枪头或牙签直接在PCR管底部戳几下，使少量菌体附着于管中，而后加入PCR相关试剂即可通过菌落PCR鉴定出单菌落中是否转入目的片段，这样就省略细菌核酸的提取，大大节省实验时间。

然而对于植物而言，愿望是美好的，现实是残酷的。植物组织富含多糖、多酚和蛋白等物质，很有可能抑制PCR反应,这该如何是好呢？不用担心，百泰克最新推出植物直接PCR试剂盒，该试剂盒不需要液氮和研磨杵研磨，也不需要钢珠破碎，更不借助任何特殊的仪器设备，方法及其方便快捷。只需截取5mg左右的植物叶片放入溶液L中，95℃孵浴10分钟，无需液氮研磨，然后加等体积溶液I，就可以直接进行PCR，方便快捷，是植物领域的科研工作者的最佳选择之一。植物直接PCR试剂盒的特点有：

* 在12 分钟内可以一步提取植物基因组DNA。
* 不需要酚/氯仿抽提。
* 不需要液氮对植物组织进行冰冻、机械处理、纯化或者DNA 的沉淀。
* 含PCR MIX,裂解后取2ul就可以直接PCR。
* 不需要上样缓冲液和染料。
* 提取物在4℃可以保存6周。

实例1：
1、截取5mg左右水稻叶片放入1.5ml 离心管中，加入100μl溶液L，确保叶片浸没在溶液中。
2、95℃孵育10 分钟，此时DNA已释放但叶片并没有明显的消化。
3、加入100μl溶液I。Vortex混合。直接PCR。
4、PCR反应体系配制：
抽提物 2 ul
2×PCR Mix 25 ul
上游引物 1 ul
下游引物 1 ul
H2O 21 ul
总体积 50 ul
5、在PCR仪上进行如下反应：
94℃ 3min
94℃ 0.5-1min
50-65 C 0.5－1min 30-35个循环
72°C 0.5－2min
72°C 10 min
6、8%聚丙烯酰胺胶电泳，银染。