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2015创新产品:单细胞建库真轻松
【字体: 大 中 小 】 时间:2016年02月23日 来源:生物通
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QIAGEN针对单细胞测序,革命性地推出了REPLI-g Single Cell DNA/RNA Library Kit,适用于Illumina测序平台。此产品基于QIAGEN的REPLI-g技术,极大简化了工作流程,一天之内即可以单细胞或微量DNA为样本,完成标准化单管式文库构建。整体流程中无需引入任何PCR扩增步骤,避免了额外的偏倚,从而获得高品质测序文库。
每到年末,生物通都会奉上一场技术盛宴 – “生命科学十大创新产品”评选,让你不错过每一项创新的产品和技术。2015年年末,经过一个月的网络投票,并参考专家意见,2015生命科学十大创新产品终于诞生了。(延伸阅读:2015生命科学十大创新产品揭晓)
QIAGEN针对单细胞测序,革命性地推出了REPLI-g Single Cell DNA/RNA Library Kit,适用于Illumina测序平台。此产品基于QIAGEN的REPLI-g技术,极大简化了工作流程,一天之内即可以单细胞或微量DNA为样本,完成标准化单管式文库构建。整体流程中无需引入任何PCR扩增步骤,避免了额外的偏倚,从而获得高品质测序文库。
REPLI-g系列已经有很多知名产品,这两个可谓新面孔。它们基于多重置换扩增(MDA)技术和GeneRead™ 文库构建技术,通过优化的酶和溶液体系保证了高质量的文库构建,避免了扩增偏向,同时维持了样品的基因组多样性。在文库构建的各个步骤之间,不需要样品纯化的步骤,最大程度地减少了起始样品的损失以及交叉污染的问题。
通常情况下,PCR反应对于高GC或AT区域的cDNA片段扩增效率很低或无法进行扩增,从而导致错误的测序结果。REPLI-g Single Cell DNA/RNA Library Kit通过使用具有高保真性的MDA技术,使得扩增结果的序列偏向几乎可忽略,而基因型信息丢失也极少。
DNA版本
REPLI-g Single Cell DNA Library Kit含有经优化的Phi29聚合酶,在独特缓冲液的配合下,保证了基因组范围内高GC含量区域的均一化扩增,从而保证了后续测序反应的均衡覆盖。此外,Phi29聚合酶因具有1000倍普通PCR聚合酶的高保真性而使得REPLI-g扩增产生的假阳性、假阴性结果降至最低。试剂盒中专门配备的缓冲液及试剂可进行特殊而有效的去污染步骤,避免对于污染的DNA进行扩增,保证了结果的高度可靠。
RNA版本
REPLI-g Single Cell RNA Library Kit则专门为在单细胞转录组层面进行转录调控研究而设计。该试剂盒可提供对单细胞或极微量样本进行全转录组扩增的全部必要试剂,并可以构建适用于Illumina NGS平台的测序文库,适合于发育生物学研究、系统生物学研究、肿瘤细胞异质性分析以及干细胞研究。
它含有全新的REPLI-g SensiPhi DNA聚合酶,以及一系列经优化的缓冲液和试剂,可用于1-1000个细胞或等量少量样本的全转录组扩增(WTA)。在高效的细胞裂解、gDNA去除以及灵敏的逆转录过程后,多重置换扩增(MDA)技术被用于在全转录组范围内进行均一的、无偏倚的cDNA扩增。利用REPLI-g Single Cell RNA Library Kit制备的测序文库可保证每个单细胞保留其特有的基因表达谱。