如何选择合适的浓缩离心管？[选购宝典]

一提起蛋白质浓缩、更换缓冲液，我们都会想起超滤。这是一种我们都很熟悉的膜分离技术。它可用来分离溶液中极小的颗粒和溶解的分子。这种方法的最大特点是操作简便，只需要浓缩离心管和离心机，即可圆满完成我们的任务。如何选择？请看本文。

一提起蛋白质浓缩、更换缓冲液，我们都会想起超滤。这是一种我们都很熟悉的膜分离技术。它可用来分离溶液中极小的颗粒和溶解的分子。这种方法的最大特点是操作简便，只需要浓缩离心管和离心机，即可圆满完成我们的任务。

与层析、透析等方法相比，超滤对被处理的分子更加温和。它不需要有机萃取，就不会导致蛋白变性。这种方法非常高效，可同时浓缩和纯化分子。操作可在低温（比如冷库）下进行。另外，快速、便宜，也是许多人青睐它的原因。

浓缩离心管的操作很简单。选择适当的浓缩离心管，加入待处理的样本，按照离心管的指示进行离心操作，最后回收截留的样本。在离心力的作用下，溶液中的小分子溶质和溶剂透过超滤膜，被收集在滤过液收集瓶中，而大分子溶质被超滤膜截留在浓缩离心管中。这种分离的主要依据是分子大小，但分子形状和电荷等其他因素也会有影响。

一般来说，超滤的回收率可达90%以上。样本损失大多是由于滤膜表面和容器表面的非特异性吸附引起的。因此，选择口碑好、高品质的浓缩离心管非常重要。Pall作为过滤方面的老牌公司，提供了多种浓缩离心管，可对50 μl到60 ml的样本进行高效的浓缩和脱盐。它配备了Omega（改良的聚醚砜）膜，确保低的非特异性吸附和高的回收率。当然，这个的前提是你选对了浓缩离心管。

如何选择浓缩离心管

1. 按体积

Pall提供了4个系列的浓缩离心管，适合处理不同体积的样本。你可以根据你的样本量来选择。不过，如果样本浓度低体积大，可以选择较小容积的浓缩离心管多次重复加样离心。

产品	样本体积
Nanosep® 浓缩离心管	< 0.5 mL
Microsep™ Advance 浓缩离心管	0.5-5.0 mL
Macrosep® Advance 浓缩离心管	5-20 mL
Jumbosep™ 浓缩离心管	20-60 mL

2. 选择适当的截留分子量（MWCO）

一旦样本体积确定，下一步就是选择适当的MWCO。对于蛋白质而言，建议所选滤膜的MWCO是欲截留分子大小的1/6-1/3。通常，截留孔径越小，流速越慢，但截留比例更大。因此，如果流速是主要的考虑因素，建议选择MWCO为1/3的滤膜；如果重点考虑截留比例，那么最好选择更致密的膜。

友情提示一下，超滤膜对分子的截留是由多个因素决定的。在截留分子量之外，你还有必要考虑分子形状、电荷、样本浓度、样本组成及操作条件。也许，线性的DNA分子溜走了，而球状的分子却被保留下来。总之，根据下表来选择MWCO就基本没错了。为了防止大家拿错管子，Pall还贴心地将不同MWCO的浓缩离心管设置成不同的颜色，以方便识别。

核酸应用的MWCO选择

MWCO	碱基对（双链）	碱基（单链）
3K	16-32 bp	32-65 bs
5K	25-50 bp	50-95 bs
10K	50-145 bp	95-285 bs
30K	145-285 bp	285-570 bs
50K	240-475 bp	475-950 bs
100K	475-1450 bp	950-2900 bs
300K	1450-2900 bp	2900-5700 bs
1000K	4800-9500 bp	> 9500 bs

蛋白应用的MWCO选择

MWCO	膜额定的孔径大小	生物分子的大小	生物分子的分子量
3K	-	-	10K-20K
5K	-	-	15K-30K
10K	-	-	30K-90K
30K	-	-	90K-180K
50K	5 nm	15-30 nm	150K-300K
100K	10 nm	30-90 nm	300K-900K
300K	35 nm	90-200 nm	900K-1800K
1000K	100 nm	300-600 nm	> 3000K

浓缩离心管的应用

浓缩

这是大家都很熟悉的应用。超滤可很方便地浓缩经过稀释的蛋白质或DNA/RNA样本。它很温和，不会打断长达100 kb的DNA，也不会导致蛋白酶活的损失，同时也很高效，回收率通常高于90%。

之前，美国McGuire VA medical Center的Katrina Stumpf曾与我们分享了她使用Microsep浓缩离心管的经验。她利用这些装置来浓缩一种小肽。操作过程中，她发现甘油了影响浓缩。之后，她先使用MWCO较大的装置，接着将滤过液加到MWCO较小的装置上。虽然耗时长一些，但是顺利完成了浓缩任务。她认为Microsep浓缩离心管简便易用，操作手册详细，信息量大。

脱盐和缓冲液交换

超滤带来了一种方便而高效的方法，可去除和交换溶液中的盐、去除变性剂、分离复合分子、去除低分子量组分，或者快速改变离子或者pH环境。比如在用两种或两种以上的限制性内切酶进行酶切时，有时找不到通用的酶切缓冲液，就可以借助浓缩离心管，更换缓冲液。

组分分离

当然，超滤无法完全分离两种分子量接近的分子。为了有效分离，待分离分子的分子量至少要相差一个数量级（10X）。对于PCR产物的纯化和回收，超滤就很适合。PCR反应混合物里含有多种盐、游离的核酸、甘油、蛋白和引物，因此大多数的下游应用都要求对PCR产物进行某种纯化。超滤的方法快速，操作少，产率高，也不损伤DNA。

最后提醒一下，浓缩离心管是一次性的工具，不建议重复使用。不过，由于价格不便宜，有些研究人员也尝试重复使用。他们的经验是，用于同一样本，至少两次没问题，用完之后用蒸馏水冲洗一下，并保存在20%的酒精中。不过，这只是个人经验，仅供参考哦。（生物通 余亮）

欢迎索取Pall浓缩离心管的更多资料和应用指南