从抗体入手，提高实验的重复性[创新技巧]

生物医学研究的重复性不高，这其中的原因有很多，有些要追溯到实验的设计和执行，有些与研究人员的操作不当有关。当然，细胞系和抗体也承受了不小的压力，它们经常被认为是不可靠的。为此，抗体表示不服：“怪我咯？谁叫你们不验证？”

2015年6月，一篇发表在《PLOS Biology》上的文章称，生物医学研究的重复性低于50%。一石激起千层浪，重复性的问题一下子成为焦点。其实，这并非新鲜事。早在2012年，时任Amgen血液学/肿瘤学团队主管的Glenn Begley就在《Nature》上撰文称，近90%的临床前研究无法由Amgen的科学家重复。

为何重复性如此之低？这其中的原因有很多，有些要追溯到实验的设计和执行，有些与研究人员的操作不当有关。当然，细胞系和抗体也承受了不小的压力，它们经常被认为是不可靠的。为此，抗体表示不服：“怪我咯？谁叫你们不验证？”

抗体验证，看上去很美

人们普遍认为，验证抗体是厂商的责任。其实，厂商又何尝不想呢？每年这一块的市场大约有20亿美元，足够刺激厂商推出完美的产品。然而，这么多年过去了，依旧没有一家公司能够这样做。

在制造抗体时，没有一个厂商能够验证产品的每个可能应用。每个实验室，每个操作，每一组蛋白都是不同的，因此，验证抗体，人人有责。然而，学术界和工业界的科学家看待这个问题的角度不同。大型生物技术公司必须仔细检查他们的结果，以确保数据是可靠的，潜在产品是安全的。下游投资也许达到数百万美元。因此，他们必须投入大量时间来验证抗体。

Begley表示，他在Amgen的科研团队尝试在内部验证广泛的抗体产品。“我们购买多个厂家的抗体，然后在使用之前严格地验证它们。我们看到了相当大的批间差异，因此在使用每一批新抗体时，验证的确有必要，”Begley说。

然而，这种验证超出了科研实验室的范畴。尽管科研人员也意识到试剂不可靠的问题，但大多数实验室的财力不支持他们订购多管抗体，时间上也不允许他们去验证。Begley认为，科研人员侧重于优化，而在重复性上只能赌一把。为了让学术研究变得更加可靠，Begley等人呼吁提高透明度，多使用阳性和阴性对照，再多些验证数据。

我们能做些什么？

在大型生物技术公司和科研实验室之间，其实还有个中间地带，那就是小型的生物技术公司。他们与实验室一样资源有限，但在科学上必须严谨，因为正如大型公司，他们也有着压力和长期目标。那么，他们是如何完成验证工作的呢？这也许能给我们一些启示。

首先，试用装是个明智的选择，毕竟抗体价格不菲。这让实验室能够不用花太多的钱，而试用到不同的产品，过滤掉那些不合适的。“在你购买一大管之前，确定这个抗体起作用，这无疑是很实用的，”Begley说。

另一种精打细算的做法是开展盲法实验，以确保研究人员的偏向不会影响结果的解释。尽管许多小型生物技术公司都将盲法实验视为最佳实践，但是科研实验室往往不愿意在单个任务上分配多名研究人员。即使这种做法能减少错误，但在目前的研究模式下不能帮助研究人员获得成功，甚至会耽误发表的进度。

最后，Begley认为，阳性和阴性对照不能一带而过，尽管开展这些实验需要时间和经费。“它们很难产生，但这并不意味着你不用做。如果没有阳性和阴性对照，根本无法解释数据，”他说。

对于western blot这样的实验，Begley认为应提高透明度。通常，论文中只显示了成功的印迹，但没有说明有多少不成功。同时，一旦实验室产生了所需的结果，研究人员就会继续下去，这意味着那些结果未经过确认。对于已发表的结果，许多期刊接受裁剪的凝胶，突出目的条带，却使得读者对抗体的非特异性知之甚少。

值得信赖的抗体

当然，验证抗体的重任也不能完全落在研究人员的身上。供应商也需要行动起来，改善抗体的质量，以便让研究人员有更好的起点。为此，Bio-Rad新推出了PrecisionAb™抗体产品线。据介绍，PrecisionAb抗体最初集中在那些经过充分验证和严格筛选的western blot抗体，并附带广泛的验证数据。如果抗体性能欠佳，比如信噪比低或非特异性结合，那么它不会出现在这个产品线中。

那么，一个抗体要经过怎样的锤炼，才能成为PrecisionAb抗体呢？首先，每个抗体都要经过12种不同的细胞裂解液的验证，以确保它能明确检测相关细胞和组织中的目标。这些蛋白经过TGX Stain-Free凝胶的分离，之后转印并与抗体杂交。Bio-Rad通过严格的质量标准评估抗体的性能。同时，它也不会选择性抛弃一些结果，包括未出现目的条带的结果。

此外，每种抗体都提供了试用装，让研究人员能够在特定实验的背景下检验产品，并且附带阳性对照裂解液和经过验证的操作方案，帮助快速建立实验体系，节省优化的时间和费用。

加州大学戴维斯分校的Aldrin Gomes博士表示：“在所测试的 Bio-Rad 提供的抗体中，80%的抗体结果表现非常出色，这说明 Bio-Rad 大部分抗体的品质非常好，其它的抗体跟之前使用的品质好的抗体类似。”

提高生物医学研究的重复性，这需要各个方面的努力，并非一朝一夕就能改变。不过，从抗体着手，从实验着手，只要有努力，就会有收获。（生物通 余亮）

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