把细胞计数交给默克 把实验时间留给文献

——Scepter手持式细胞计数器将你从无聊的计数中解放出来

【字体: 时间:2016年05月06日 来源:默克

编辑推荐:

  在满足多数研究者基本细胞计数的要求上,手持式细胞计数器Scepter表现最为优异。此外,Scepter强大的数据分析能力也是其另一大特色。Scepter能够提供细胞直方图作为细胞计数依据,并且支持离线分析直方图。通过直方图可以获知细胞直径分布、细胞状态、各细胞组分等数据。

血球计数板的发明已经有超过100年的历史了,众所周知,这种传统的细胞计数方法虽然廉价,但却很费时费力。其实,除了这点以外,使用血球计数板进行细胞计数还有许多可变的因素,使计数结果波动,可能会大大影响我们的实验。

首先,由于使用的是显微镜肉眼观测计数,人为的因素多,使计数结果不准确,误差大。尤其是经过了一整天繁重的实验后进行计数,或需要同时对上样的多种样品进行计数时,容易使人头昏眼花,结果的准确性更难保证。

第二,重复性差导致实验结果可信度低。大家进行细胞实验时,经常需要进行3次以上的平行实验,以验证实验结果的可重复性和可信度。有时候是同一个操作者分别在几天重复同一实验,有时候是不同操作者重复同一实验。同一操作者细胞计数的重复性不会太好,不同操作者细胞计数的重复性就更差了,这会导致上样量的波动,使得平行实验的结果CV值增高,可信度降低,在发文章的时候达不到评委的要求,实验结果有被挑战,要求重做或补做实验,或被退回的可能。

第三,需要合适的稀释倍数。稀释不够,细胞太浓,不仅数的时间很长,还会导致数得眼花,数着数着就忘记哪些已经被数过,容易数错。稀释过度,细胞太稀,会使细胞分布不均匀,计数的结果代表性下降,误差增大。一般来说,最好使得稀释后的细胞在1x105-1x106/mL浓度范围内,使标准计算5个方格共会数到50~500个细胞。这个浓度范围很窄,这就要求我们在稀释细胞前能较好地估计原始样品的浓度,但很多时候都是很困难的。

第四,由于血球计数板使用的是抽样计数的原理,抽样计数时几个细胞数目的误差,会导致原始样品的细胞数目的变化被极快地放大。若原始样品的细胞浓度为2x106/mL,稀释5倍后,血球计数板5个标准方格共会数到200个细胞,若每个方格不小心少数了3、4个细胞,则计算出来的最终浓度为1.82x106/mL,会导致原始样品的浓度产生180,000个/mL的差异。(同样是原始浓度为2x106/mL的细胞样品做5倍的稀释,Scepter 计数的是50µL稀释样品中的全部细胞的数目(即2x104个细胞),因此能更准确、更精确地计数。)

还有,对于压线的细胞的计数与否需要遵循前后一致的原则(一般只计数大方格的上方和右方线上的细胞),这需要计数时提高熟练程度,才能提高重复性。

血球计数板升级替代方案

可能不少老师和同学都不知道,血球计数板是由法国科学家Louis-Charles Malassez于19世纪研发,用于血细胞计数,因此而得名。这项古老而又传统的技术一直沿用至今,但并未随着科研进步而发展,还给越来越多的研究者带来很多困扰。

升级是硬道理

古语:“工欲善其事,必先利其器”。小米加步枪能获得抗战胜利,但恐怕难以赢得现代战争。细胞研究应是同理,如今技术革新已推进到了流式细胞术,然而国内多数实验室尚不能负担的起巨大的投入,或许小型细胞计数/分析设备是多数实验者的首选。

市场上常见的自动细胞计数器,其主要可分为两类:基于图像的细胞计数器(Automated vision-based counter)和基于库尔特电阻抗原理的细胞计数器(Scepter为代表),两者原理及操作方法大相径庭。以下报告将从精准性、可靠性、便捷性等方面进行比较,希望能对广大细胞学研究者有所助益。

【准确性比较】

图1. 不同细胞浓度下各种细胞计数器的计数结果与实际数值的对比


 
上图可见:血细胞计数板在高细胞密度时,计数结果与实际细胞密度有偏差,而基于图像的细胞计数器则在多个浓度下均有较大偏差。这表明基于库尔特原理的细胞计数方法在计数准确性上优于其他两种细胞技术方法。(样品为常见的COS7细胞)

【可靠性比较】

图2. 不同细胞浓度下细胞计数的可重复性比较


 
上图可见:Scepter的可重复性均明显好于血细胞计数板和基于图像的细胞计数器。(样品为19种细胞系)

【便捷性】

图3. 三种细胞计数法的计数时间对比


 
上图可见:传统的血细胞计数板的计数时间远长于其他两种计数。库尔特原理计数法与基于图像的细胞计数法相比,计数速度更为稳定,而且计数时间约为后者的一半。Scepter计数时间最短,平均时间仅为14秒。(样品为常见的SF9,MCF7,HEK293细胞)

数据来源:血细胞计数板,您还在使用么?

Scepter的人性化设计使得使用者能够轻易上手,只需要五步:仪器校验、加载芯片、检测样品、卸下芯片、数据分析,操作方法和移液器相同,而且便于超净台内操作。(详见Scepter图文操作手册

选择Scepter™手持式细胞计数器

以上可见,在满足多数研究者基本细胞计数的要求上,手持式细胞计数器Scepter表现最为优异。此外,Scepter强大的数据分析能力也是其另一大特色。Scepter能够提供细胞直方图作为细胞计数依据,并且支持离线分析直方图。通过直方图可以获知细胞直径分布、细胞状态、各细胞组分等数据。(请参见百度百科:库尔特原理与细胞直方图)一次操作,更多的信息量,细胞研究水平因此而更上一层楼。因此,Scepter可以说是血球计数板最理想的升级替代选择。

索取Scepter产品资料

关于升级产品Scepter2.0


 
荣获诸多奖项的Scepter在2011年升级到了2.0版,新上市的Scepter2.0保留了前代产品直方图结果显示、类似移液器的操作、14秒疾速计数等诸多特色,新增如下亮点:扩大了可检测的细胞粒径(3-36μm),增强了计数精确性(在小颗粒物或小直径细胞上检测的精确性增强,CV<5%),同时升级了联机软件的功能,提供更加全面的数据分析,使之成为目前市场上小型精确细胞计数设备的最佳选择!同时,前代产品仍可以通过联机升级固件,轻松获得Scepter 2.0的所有功能,而不影响当前的使用效果!更多详情请垂询默克生命科学部400-889-1988-2分机。

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