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2016版流式细胞仪选购指南[选购宝典]

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2016年6月17日 来源:生物通

摘要:

  对于单个细胞及其他生物粒子的分析,流式细胞术已经成为一种不可或缺的方法。它让研究人员能够在单细胞水平高效地鉴定关键的标志物,如小分子、核酸以及肽段和蛋白。如今,仪器和试剂的创新为研究人员带来了更多的选择。如何选择一台适合的仪器?在选购中要注意些什么?赶快来看看吧。

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光学系统

一旦细胞被聚焦成一束,它们就要接受光源(通常是激光)的拷问。光的破坏和散射,提供了有关细胞物理性质的信息。一些仪器包含多个激光光源,让用户获得更多数据。

在许多流式系统中,光的散射以两种方式被监控。前向散射光(FSC)带来细胞大小或表面积的信息。较小的细胞折射较少的光,而较大的细胞折射较多的光。第二种是侧向散射光(SSC),它提供了细胞复杂度的信息或内部结构的检测。综合这两个测量结果,研究人员可确定多个参数和功能,从而区分不同的细胞类型。

光散射模式只是提供了细胞的物理信息。若要拷问细胞的分子特征(如基因表达、蛋白定位或细胞周期的状态),细胞必须经过某种方式的标记。这通常使用荧光染料或荧光标记的抗体或纳米颗粒来实现的。

最近,一些聚合物染料(如BD Biosciences的Horizon和Sirigen试剂)已经出现,它们的亮度比传统染料亮几个数量级,让研究人员能实现更精细的检测,特别适合稀有细胞。同样地,不断增加的氨基活性染料也在帮助研究人员确定和排除死细胞,从而改善分析和分选的质控能力。

同时,纳米颗粒(如赛默飞世尔的Qdot纳米晶体)为长时间的实验带来了更加一致的荧光,因为它们不会发生光漂白,即使体外实验变成体内实验,比如干细胞移植到动物体内,它们也能被监控。

染料、抗体和纳米颗粒的选择在很大程度上取决于应用和目标。在针对一个非常特异的细胞类型时,如CD4+ T细胞,荧光标记的抗体让你能精确定量混合物中的这些细胞。不过许多应用并不需要这么精确,比如细胞活力或细胞周期分析。在这种情况下,染料就已经绰绰有余了。

不同的荧光基团在不同的波长下激发和发射,因此,许多流式细胞仪提供了多个光源(激光器)和发射滤光片。流式仪器中常用的激光器有:蓝色(488 nm)、黄绿色(561 nm)、红色(640 nm)、紫色(405 nm)和紫外光(355 nm)。许多厂商提供不同的滤光片,让研究人员能够实现多重检测,以监控多个标志物。这些实验的挑战在于优化荧光标记和现有的激光器,以便尽量减少光谱重叠。

无论是散射光还是荧光,细胞的光信号都由光电倍增管(PMT)收集,将光强度转换为电子读数。在某种程度上,PMT的灵敏度决定了检测的分辨率 – 你可以检测的颗粒或亚细胞组分有多小,以及你是否能很好地区分邻近细胞的信号。

对于某些仪器,特别是提供图像数据的仪器,PMT已被替换成CCD照相机。这些仪器不仅能提供荧光标记的强度信息,还能提供这些标记在细胞内的精确定位。对那些监控蛋白转位或细胞信号的实验而言,这特别有用。

当然,成像流式细胞仪虽然带来更多信息,也产生了更大的文件,带来数据存储的问题,不过将数据推送到云平台,可缓解这一问题。此外,分析和处理数据的软件正在改善,变得更加用户友好,让经验有限的研究人员也能轻松使用。

表1:各公司的流式细胞仪一览表

厂商

仪器

检测的光(FSCSSCFL*

激光器数量

光通道数量

细胞分选功能

Acea Biosciences

NovoCyte

FSC,SSC,FL

Up to 3

Up to 15

Apogee Flow Systems

A50-Micro

FSC,SSC,FL

Up to 3

Up to 12

Universal

FSC,SSC,FL

Up to 3

Up to 12

Auto40

FSC,SSC,FL

1

Up to 5

BD Biosciences

Accuri C6 Plus

FSC,SSC,FL

2

Up to 6

FACSAria III

FSC,SSC,FL

Up to 6

Up to 20

FACSAria Fusion

FSC,SSC,FL

Up to 6

Up to 20

FACSVerse

FSC,SSC,FL

Up to 3

Up to 10

Influx

FSC,SSC,FL

Up to 10

Up to 16

LSRFortessa

FSC,SSC,FL

Up to 4

Up to 18

Beckman Coulter

CytoFlex

FL

Up to 3

Up to 13

Gallios, 10-color

FSC,SSC,FL

Up to 4

Up to 12

MoFlo XDP

FSC,SSC,FL

Up to 5

(+ laser engine)

Up to 20

Bio-Rad

S3e

FSC,SSC,FL

Up to 3

Up to 6

Cell Signaling Technology

CellSimple

FSC,SSC,FL

1

Up to 4

ChemoMetec

NucleoCounter NC-3000

Darkfield, Brightfield, FL

8 (LEDs)

9 (interchangeable emission filters)

Cytonome

Viva G1

FSC,SSC,FL

1

3

Hydris

FSC,SSC,FL

1

3

Millipore

FlowSight

SSC

Up to 5

Up to 12

ImageStreamX Mark II

SSC

Up to 7

Up to 12

Guava easyCyte 5

FSC,SSC,FL

1

Up to 5

Guava easyCyte 12HT

FSC, SSC,FL

Up to 3

Up to 13

Muse

FSC,FL

1

Up to 3

GE Healthcare

Cytell

Brightfield,FL

Sold-state illuminator, LED

Up to 5

Handyem

HPC-150

FSC,SSC,FL

1 or 2

Up to 6

IntelliCyt

iQue Screener

FSC,SSC,FL

2

Up to 6

Miltenyi Biotec

MACSQuant Analyzer 10

FSC,SSC,FL

3

Up to 10

MACSQuant Tyto

FSC,SSC,FL

Up to 3

Up to 10

MACSQuant VYB

FSC,SSC,FL

Up to 3

Up to 10

Molecular Devices

SpectraMax MiniMax

Brightfield,FL

Up to 3

3

Sysmex-Partec

CyFlow Counter

SSC,FL

1

Up to 3

CyFlow Space

FSC,SSC,FL

Up to 5

Up to 16

(可升级)

Thermo Fisher Scientific

Attune NxT

FSC,SSC,FL

Up to 4

Up to 16

* FSC = 前向散射光;SSC = 侧向散射光;FL = 荧光
(此表来自Biocompare,数据仅供参考)

深入了解默克密理博ImageStreamX Mark II成像流式细胞仪

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