一种平行分析RNA和蛋白表达的新方法[新品推荐]

如今，为了实现完整的基因表达研究，人们希望同时评估转录和翻译调控。因此，越来越多的研究人员正在寻找各种方法来同时分析RNA和蛋白的表达。传统方法是将细胞一分为二，并行开展这些分析。这并非不可行，只是步骤繁多，在样品量有限时有困难。

为此，Bio-Rad开发出一种平行分析RNA和蛋白的简化方案。它利用SingleShot Cell Lysis Kit，跳过了RNA纯化的操作，直接开展下游的逆转录-定量PCR（RT-qPCR）和western blot分析。研究表明，96孔板中一个孔的细胞就足够了，这大大降低了细胞培养的负担。

整个分析过程大致如下：你只需培养一份细胞，而不需要像往常一样，平行培养RNA和蛋白分析的细胞。之后用SingleShot Cell Lysis Buffer裂解细胞，然后将细胞裂解液分为两份，与不同的缓冲液孵育，分别获得RNA和蛋白组分。之后开展RT-qPCR和western blot分析。

在一项内部研究中，研究人员利用这种方法分析了NT2细胞分化过程中各种转录因子的RNA和蛋白表达。他们发现，在视黄酸处理后，OCT4和NANOG的mRNA和蛋白水平都明显下降。有趣的是，尽管HOXB3的mRNA水平增高了17倍，但蛋白水平却下降了49%。这些结果不仅有趣，也证明了此方法在监测mRNA和蛋白水平上的价值。

过去，在开展RT-PCR和western blot分析时，人们需要在大的培养皿中培养细胞。如今，研究人员证明，96孔板单孔中的细胞已足以开展这两项分析。SingleShot Buffer让RNA纯化不再成为必需，因为它去除了基因组DNA，而RT-qPCR反应可以耐受RNA裂解液。至于western blot分析，你也可以借助stain-free技术对总蛋白进行均一化，控制上样量的差异，从而绕过了蛋白定量。

将培养规模从培养瓶缩小到96孔板，这不仅仅减少了试剂消耗，降低了实验成本，也缩短了培养时间。在内部实验中，每孔只需要接种5000个细胞，使用200 ul培养基。对于那些研究原代细胞的实验室来说，这种实验规模可能特别有用。通过降低培养规模，研究人员更容易产生有统计意义的结果。

SingleShot方案为评估基因表达和蛋白水平提供了一个完整的流程，让人们能利用少量细胞平行分析RNA和蛋白的表达。Bio-Rad的研究人员认为，这种方法不仅能监测NT2分化时转录因子的表达变化，也能应用于其他的生物标志物或转录因子。

关于SingleShot流程的具体操作，可参看Bio-Rad新发布的应用指南：Parallel Analysis of RNA and Protein Expression Using SingleShot™ Cell Culture Lysates。（生物通 余亮）

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