Covaris超声辅助RNA提取显著提高合胞病毒(RSV)检测灵敏度

呼吸道合胞病毒在成年患者体内由于载量低，不容易通过传统的方法检测到，所以需要更灵敏高效的检测手段来进行处理、诊断。Covaris AFA超声处理方法可以充分释放生物大分子，提高核酸提取得率，从源头上提高检测灵敏度。避免了由于检测灵敏度的不足造成假阴性的诊断，而延误患者的治疗。

呼吸道合胞病毒（Human Respiratory Syncytial Virus, RSV）是一种RNA病毒，可导致发热、鼻炎、咽炎及上呼吸道感染等症状。在儿童感染患者中，RSV的病毒载量(viral loads)一般较高，因此用常规商业化的抗原检测试剂盒比较容易检出。而在成年人患者中，病毒载量要低得多，为了保证检测的准确性，则需要灵敏度更高的检测方法。

在临床上，RSV检测常用的样本有鼻拭子和痰液样本，其中痰液样本由于容易获得并且未经稀释，可以得到很高的灵敏度。但由于痰液样本处理步骤复杂，难以实现高通量的管理和提取。在今天分享的这篇文章中，作者比较了Covaris超声辅助破碎方法与Glass beads研磨方法对RSV病毒提取效率的影响。

为了验证超声处理是否会影响病毒RNA提取质量，作者首先使用RT-PCR方法分别检测了等量RSV-A-GFP模式菌株经Covaris超声辅助提取和未经超声直接提取的产物，结果显示平均Ct值为21.28±0.08，两者没有明显差异。证明超声处理对病毒RNA的提取及检测没有负面影响。

随后，作者分别使用Covaris超声法和Glass beads法将对7个样本进行RNA提取，依然采用RT-PCR方法对病毒含量进行鉴定。结果显示，与Glass beads方法相比，经Covaris超声法提取的样本，检测到的Ct值明显减小(变化范围1.0 - 4.0 log)，即经Covaris超声法提取的病毒RNA含量更高。尤其是在7号样品中，使用Glass beads方法提取后，检测RSV-B呈阴性，而Covaris方法提取后检测结果为阳性。（如下表）

由此可见，对于常规方法难以获得理想提取效果的样本（比如本文中的痰液样本），Covaris超声处理可以充分释放生物大分子，提高核酸提取得率，从源头上提高检测灵敏度。不仅如此，Covaris超声提取稳定性强，重复性好，并且还有高通量的仪器可供选择，在需要进行标准化、规模化的样本处理时，也有着非常大的优势。

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原文出处

Development of a real-time multiplex RSV detection assay for difficult respiratory samples, using ultrasone waves and MNAzyme technology

David Nauwelaersa,∗, Leen Vijgenb, Claire Atkinsonc, Alison Toddd, Anna Maria Gerettic, Marc Van Ranste, Lieven Stuyvera

http://www.journalofclinicalvirology.com/article/S1386-6532(09)00408-9/abstract?sukey=3997c0719f151520762599d4c09f49c74a8d10df0df88b069435762152f6567f1c4ef9c71f996ae507d2b97ff91d2e77