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为液体活检打好基础,从血浆中高效提取游离DNA[新品推荐]

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2017年1月12日 来源:生物通

摘要:

  我们首先需要从血浆中高效分离游离DNA。这并不如想象中简单,因为血浆中游离DNA的量非常低,通常低于10 ng/mL。好在,市场上已经有了专门的试剂盒。比如,德国核酸提取专家MN就推出了NucleoSnap DNA Plasma kit。

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大家都知道,人体内的细胞偶尔会发生凋亡。在这个过程中,DNA被片段化,并分泌到细胞外。健康细胞、肿瘤细胞、胎儿细胞以及移植细胞都释放DNA到血液中。通过这种游离核酸的分析,我们能够非侵入性地监控疾病,检测未出世婴儿的非整倍体,或了解移植排斥。

于是,游离核酸便成了当今医学研究的热点。在癌症研究中,它们是大有希望的靶标,可用于监控疾病进程、治疗效果或癌症复发。此外,与常用的组织活检等侵入性方法相比,游离核酸的分析通常还能实现更早期的诊断。这种分析也就是如今大热的液体活检。

在液体活检过程中,人们通常用EDTA采血管或专门的采血管进行采血。在血液中的细胞组分沉淀之后,取上清液来分离游离DNA(cfDNA)。接着,利用qPCR或毛细管电泳来定量cfDNA。之后,利用数字PCR、定量PCR或NGS技术等灵敏方法,人们可检测miRNA、单核苷酸变异或染色体突变。

当然,我们首先需要从血浆中高效分离游离DNA。这并不如想象中简单,因为血浆中游离DNA的量非常低,通常低于10 ng/mL。好在,市场上已经有了专门的试剂盒。比如,德国核酸提取专家MN就推出了NucleoSnap DNA Plasma kit。

这个试剂盒采用硅胶模技术,能够从1-10 mL血浆中高效提取游离DNA。试剂盒中的NucleoSnap DNA Plasma Column最多可处理5 mL血浆,并以非常小的体积洗脱(20-50 μL),带来高度浓缩的DNA。

整个操作过程也是大家熟悉的结合-洗涤-洗脱。首先,将血浆样品与蛋白酶K和结合缓冲液混合,并上样到硅胶柱上。之后应用真空抽滤,让DNA与硅胶模相结合。两步洗涤可有效去除污染物质,如PCR抑制剂。最后,利用洗脱缓冲液将高度纯化的DNA洗脱。整个过程大约需要45分钟。

至于游离DNA的产量,这要取决于供体的健康状况、血液的采集和处理、血浆制备等因素。相当一部分的游离DNA来源于凋亡细胞,因此,它们可能是高度片段化的。NucleoSnap DNA Plasma kit可分离片段大小在50-1000 bp的DNA,让你不错过任何关键的信息。

若实验室里的样品比较多,也可以选择高通量的试剂盒,比如NucleoSnap DNA Plasma Midi或NucleoSnap 96 DNA Plasma。怎么样?看着还不错。那就来试试吧。欢迎申请试用装>>生物通 余亮)

(http://www.ebiotrade.com/)
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