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Western blot分析,你还在亲自动手吗?[新品推荐]

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2017年10月18日 来源:生物通

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  Western blot是检测蛋白质的一项经典技术,几十年来一直受到人们的欢迎。不过,令人尴尬的是,这也是一个相当耗时并且难以重现的过程,有时带来惊喜,有时则是惊吓。

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Western blot是检测蛋白质的一项经典技术,几十年来一直受到人们的欢迎。不过,令人尴尬的是,这也是一个相当耗时并且难以重现的过程,有时带来惊喜,有时则是惊吓。

典型的Western blot流程大家都清楚,首先是蛋白电泳,分离后将蛋白质转移到膜上,然后进行一系列的处理,包括封闭、一抗孵育、洗涤、二抗孵育、洗涤,最后是显影。原理很简单,但过程不简单。

每个阶段都需要精心优化,即使实验条件最终确定,每一天的结果以及每个人的结果还是有差异。于是,研究人员开始投入自动化Western blot处理系统的怀抱,这不仅能带来一致的结果,还能节约宝贵的时间。

决定Western blot成功的关键因素是什么?许多研究人员都认为是一抗,其实不然,检测过程中的每个变量都有可能影响数据质量。据Precision Biosystems公司的CEO Russ Yukhananov介绍,洗涤步骤的重要性也不容小觑哦。这家公司推出了BlotCycler全自动蛋白质印迹杂交系统,可大大提高实验的重复性。之前,ProteinSimple也推出多款自动化系统,以及单细胞Western平台—Milo。如今,研究人员有了越来越多的选择。

一抗反复使用

Cytoskeleton的GOBlot™ Western Blot处理系统是在与数百名科学家沟通后开发的,带有四种最常用的Western blot程序。在加入封闭液和抗体溶液后,程序就可以运行。GOBlot的模块化特征允许多台仪器在不同时间运行,采用不同的程序和不同的抗体,所以相当灵活。

据Cytoskeleton的副总裁Ashley Davis介绍,GOBlot的一个主要优势是一抗(实验中最昂贵的试剂)可以回收利用。科学家曾经做过实验,将一抗回收后再重复使用三次,结果都很好,信号损失可忽略不计。

Prasanna Satpute-Krishnan是GOBlot™的忠实粉丝。“在实验室的启动阶段,实验室只有我一个,GOBlot对我帮助很大,”她说。“我只需要花10-15分钟的时间来计划我的Western blot,并加入封闭液、一抗和二抗,以及洗涤液,之后就可以不受干扰地做其他事情,让机器来完成Western blot。我最喜欢的功能是单独收集用过的一抗溶液,以便再次使用。总之,GOBlot不但节约了时间,也节省了经费。”

剑桥大学的研究助理Amy Emery在癌症研究中也定期开展Western blot,并且用的是定制合成的抗体。“尽管我明白,自动化处理设备可以节省时间,因为无需手动洗涤。不过我一直不敢用,因为在我的印象中,抗体会有明显的损失。一抗真的很贵,所以我不愿意接受不必要的浪费,但Western blot设备似乎有了很大的改进,既然能重用一抗,那么我愿意尝试一下,”她说。

诊断上的应用

自动化Western blot系统还可以提供诊断功能,比如Tecan的ProfiBlot™ 48。它每次运行可处理48个胶条样本,自动分配试剂并完成洗涤和孵育。它支持一系列的蛋白质印迹应用,如传染性疾病和自身免疫病的确认,以及过敏的筛查。这台仪器符合欧盟体外诊断指令98/79/EC,在封闭环境的一次性托盘上处理整个分析,以免人体暴露于传染性物质。

Tecan的项目经理Gerald Habenbacher表示,他们已经与多家实验室合作,成功使用ProfiBlot™进行Western blot分析,并表示,这个系统的节省试剂功能可最大限度减少死体积,以便降低运行成本,同时,分配体积自动校准功能和预先设定的清洁方案使其操作起来更方便。

另一个大受欢迎的自动化系统是Bio-Rad的AutoBlot 3000。这台仪器能够在90秒内分配90个胶条,提供预先设定的实验方案,也接受用户自定义。Bio-Rad的产品经理Greg Stewart表示:“这个系统的灵活性极佳。它允许自由组合试剂体积、孵育时间、振摇速度和平台温度。AutoBlot 3000具有专门设计的托盘平台以及独特的吸液和分配系统,可以产生高度准确且重复的结果。”

尽管研究人员大多采用传统的手动方案来进行Western blot,但是自动化系统的优势越来越明显。你可以在运行Western blot的同时开展其他实验,大大节省时间,同时获得重现性高的结果。诊断领域的研究人员也可以更加放心,避免暴露于有害物质。

随着自动化的Western blot处理系统变得越来越先进,同时处理的印迹膜数量在不断增加,染色操作也有各种方案可供选择,可以满足各种各样的研究需求。当然,提高数据的质量和重现性,这更是它们的可贵之处。

(作者:Emma Easthope / 生物通编译)

欢迎向ProteinSimple公司索取自动化Western blot平台的更多信息

(http://www.ebiotrade.com/)
版权所有,未经书面许可,不得转载

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