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Azure Sapphire双模式多光谱激光成像系统

——四色荧光检测,效率更高效

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2017年11月13日 来源:深蓝云

摘要:

  现在使用Azure Sapphire™双模式多光谱激光成像系统。能够同时检测四个蛋白,大大提高了Western blot的效率。通过四色蛋白质印迹可以实现使用四个光谱不同的荧光基团和sapphire激光激发和敏感的光电倍增管(PMT)和雪崩光电二极管(APD)检测系统进行检测。

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Western印迹多重检测——同时在一个印迹膜上孵育多个探针——正在快速发展。化学发光测定允许检测单个蛋白,经过重孵育或者剥离实现检测多个蛋白,具有蛋白潜在损失和相应的信号的损失。早期Western印迹多重成像系统允许在单个印迹上同时检测两个荧光信号。研究人员迅速使用这种技术进行上样质控和目的蛋白的检测。

现在使用Azure Sapphire™双模式多光谱激光成像系统。能够同时检测四个蛋白,大大提高了Western blot的效率。通过四色蛋白质印迹可以实现使用四个光谱不同的荧光基团和sapphire激光激发和敏感的光电倍增管(PMT)和雪崩光电二极管(APD)检测系统进行检测。


 
3种不同检测器检测

Sapphire™双模式多光谱激光成像系统具有无与伦比的灵活性、出色的灵敏度和图像质量。是市场上唯一采用扫描式和CCD双模式的成像系统;使用PMT检测器进行蓝色通道和同位素标记磷屏成像,使用三个独立的APD检测器进行绿色、红色和近红外通道检测,使用CCD检测器进行高灵敏化学发光检测;动态范围更宽,分辨率可达10μm,分辨更细节,灵敏度更高。可进行四色荧光标记蛋白成像、2D-GIGE胶、in cell western、荧光标记芯片、组织切片、高灵敏化学发光、普通凝胶成像、同位素标记磷屏成像等等,给实验者更多选择。


 
Sapphire双模式多光谱激光成像系统

四色荧光检测实验案例如下:

材料和方法

使用4-15%的Tris-Glycine凝胶电泳。使用低荧光PVDF膜进行转印。转印后,印记膜封闭30分钟使用Azure荧光印封闭液稀释 ratanti-tubulin(绿), rabbit anti-beta-actin(红)和chicken anti-GAPDH(灰)一抗和anti-transferrin(蓝)以前已经被AzureSpectra 490染料标记使用AzureSpectra标记试剂盒。

将印迹膜使用Azure荧光印记漂洗buffer进行漂洗,然后使用goat anti-rat 550(绿),goat anti-rabbit 700(红),goat anti-chicken 800(灰)。 孵育后,印迹像以前一样在Azure 荧光漂洗buffer中进行漂洗,然后在PBS中最后冲洗一遍。

成像之前将印记膜晾干,使用Azure Sapphire双模式多光谱激光成像系统进行成像。

结果和讨论

 

图1

Western blot印迹膜使用Azure Sapphire双模式多光谱激光成像系统进行成像、图1展示的灰色图,转铁蛋白(a),tublin(b),beta-actin (c) 和 GAPDH (d),整合图(e)。具有更高的灵敏度,特异性,更高的信噪比,允许快速准确进行精准定量。

在一张印迹膜上同时成像四种蛋白大大增加了Western印迹的效率,节省了时间和珍贵的样品,并且可进行精准定量。 该方法还允许使用新的测定法,例如蛋白互做研究:磷酸化蛋白测定等。

欢迎索取Azure Sapphire双模式多光谱激光成像系统的详细资料

(http://www.ebiotrade.com/)
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