Caco-2细胞用于药物转运研究，需要注意这一点

药物的吸收首先需要通过小肠上皮细胞。来源于人结肠癌细胞的Caco-2细胞，在结构和功能上与人小肠上皮细胞相似，因此被广泛用作一种研究药物吸收、运输和代谢的体外模型。

在培养条件下，Caco-2细胞可形成与小肠上皮细胞相同的细胞极性和致密的单细胞层结构，分化出绒毛面A（apical，相当于肠腔侧）和基底面B（basolateral，相当于肠内壁侧）。由于这种性质，Caco-2细胞单层已成为研究药物吸收和转运的有效工具。

目前，制药行业正利用Caco-2细胞开展渗透性分析，以估计候选药物穿过小肠上皮的能力。Caco-2细胞模型的具体应用包括：研究口服药物是从A到B方向还是从B到A方向转运，并明确药物吸收是被动扩散还是主动转运，为给药方案提供依据。

当然，我们首先要培养Caco-2细胞。细胞通常被接种到Transwell或Snapwell小室中，这些小室分为上下层，中间以聚碳酸酯膜相隔，可配合多孔培养板使用。开展研究时，将待测化合物添加到细胞单层的A侧或B侧。孵育一定的时间后，测定化合物的浓度，并计算每种化合物的渗透速率。

早期，Caco-2细胞单层检测大多使用放射性标记的化合物，但如今大多数实验室已经采用液相色谱-质谱（LC-MS）和液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）。质谱的使用不仅避免了放射性标记的化合物，还可以同时测量多种化合物。

不过，需要注意的是，A侧或B侧的粗制样品提取物可能包含一些细胞碎片或颗粒物。这可能会引起HPLC柱的堵塞。因此，有必要对样品进行过滤。同时，必须注意过滤过程不能对样品产生不利影响，既不能截留了感兴趣的化合物，又不能让滤器本身的材料进入样品，让图谱无故多了几个峰。

因此，研究人员大多使用96孔滤板来进行样品澄清，以便在HPLC/MS之前去除细胞碎片或颗粒，同时又不损失目标分子。

Pall的AcroPrep Advance 96孔滤板就是一个不错的选择。它采用耐化学腐蚀的材质，为有机溶剂中样品的处理带来稳定的平台。聚丙烯的板子和GHP的膜材不会和DMSO发生相互作用，无需担心有机溶剂的污染。因此，它保证样品的完全回收以及低的非特异性结合。

此外，创新的小孔设计为你带来更快速的过滤，各孔流速一致，同时降低了死体积；出口端设计也经过优化，可以最大限度减少孵育过程中的样品泄漏，让样品直接流入接收板而无需担心交叉污染。

至于孔径的选择，与HPLC柱配合使用的大多数过滤器是0.45 μm孔径的。对于那些填料直径在5 μm或以上的HPLC柱，这是OK的，因为填料之间的空隙足够大，让0.45 μm以下的颗粒能够顺利通过。

AcroPrep Advance 96孔滤板除了提供0.2 μm和0.45 μm两种孔径的滤膜，还有三种不同规格可供选择：350 μL、1 mL和2 mL，分别适合300 μL、900 μL和1.9 mL的样品体积。

大家都知道，Caco-2细胞不好养，药物转运的实验不好做，也许，重视实验的每一个细节，最终才能获得漂亮的结果。（生物通  余亮）

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