2015 版《中国药典》农残检测的解决方案以及方法包介绍

本文介绍了赛默飞世尔科技色谱质谱部应用部门针对客户需求提出的农药检测简易仪器使用流程，及其成功案例和发表文章。

一．方法包简介

方法包是赛默飞世尔科技色谱质谱部应用部门针对客户需求提出的简易仪器使用流程，方法包内所涉及的化合物均为常见的能在 GC/MS 上检测的化合物，如农药残留、多环芳烃、多氯联苯、多溴联苯和多溴联苯醚、邻苯二甲酸酯等。方法包的作用就是能使客户更快更简便得使用仪器，尽快上手。

方法包包括进样方法、数据处理方法（TraceFinder 方法文件夹）、相关应用文章、相关标准、色谱柱信息、前处理方法、数据文件等，客户可以直接调用进样方法和数据处理方法完成化合物的定性定量分析。

由于 Thermo ScientificTM TSQ 8000 Evo 采用 T-SRM 进样方法而不是分时间段的扫描方法，原来的进样的方法可以直接调用，即使保留时间会有微小的偏差，也不会影响最终的结果。另外， TraceFinder 软件自带的数据库可以直接编辑数据处理方法，数据库里包括化合物的名称、离子对、碰撞能量、定量离子、定性离子、 CAS 号等信息。同时， TraceFinder 软件可以根据数据处理方法自动关联生成 TSQ 8000 Evo 的方法文件。这样应用 TraceFinder 就可以直接生成数据处理方法和进样方法。整个过程都是自动化的，几乎不需要操作者手动输入任何操作信息。

二．仪器简介

秉承着在气相色谱三重四极杆质谱中技术的一贯领先优势， Thermo Fisher Scientific 在推出 TSQ 8000 之后再次创新，推出了更新的一款气相串接质谱仪 TSQ 8000 Evo，该款高效的 GC/MS/MS 提供了永不停机的生产率，其出色的灵敏度，超快的扫描速度，简便的 MSMS 功能，满足最苛刻的定量定性分析要求，为食品安全、环境分析、法医和制药应用分析提供基础。
TSQ 8000 Evo 主要特点：
• AutoSRM 功能自动优化二级离子对信息；
• 定时保留时间 SRM 功能（T-SRM）和定时保留时间 SIM 功能（T-SIM）使高通量检测成为可能，并且优化方法设置参数，无需分配时间段；
• 最新的 TraceFinder 软件，提供最新的技术平台，界面友好的色谱分析软件，可以直接调用数据库信息自动建立数据处理方法及进样方法；
• 高达 800 MRM/s 的扫描速度，即使在极限高速扫描条件下仍不会过多损失灵敏度
• 在质谱不泄真空的情况下，更换整个离子源，节省常规系统维护时间，简化操作；
• 双灯丝设计，并且灯丝在同一侧；
• 离子源上具有双加热区，有效去除基质对离子源的污染，节省维护时间；
• 弯曲的预四极杆，有效去除中性噪音，减少背景并提高灵敏度。
• 方法桥，可以读取 Thermo ScientificTM ISQ 单四极杆气质联用仪的方法或者其他公司的 SRM 方法。

三．化合物简介
新药典共需要检测 76 种农药（包含 2 种内标化合物）

 

四．相关法规及政策
2014 年 3 月，国家药典委员会官网发布关于《中国药典》 2015 年版通则（草案）公开征求意见的通知，并指明国家药典委组织相关专业委员会已完成了通则（附录）编制及编码的研究工作。 2015 年，国家食品药品监督管理总局发布关于《中华人民共和国药典》（2015 年版）的公告，新版药典将于 2015 年 12 月 1 日起正式实施。

2015 年版本《中国药典》收载药品数量达到 5608 个，比 2010 年的药典增加了 20%，不但药品质量检测与控制方法及中药、化学药和生物药标准将得到广泛性修订、完善及提升，而且在中药标准方面，基本建立了适合中药特色与特性的整体控制质量的新体系和新模式。新版药典更加注重体现中药特色，表达中药特点，并致力于中药质量整体控制水平的进一步提高，筹建中国药品标准物质谱图库，引领中药标准国际化进程。《中国药典》 2015 年版通则增订了中药材农药残留量测定法，其中包括用气相色谱串联质谱测定 74 种农残，液相色谱串联质谱测定 153 种农残，为中药材农残测定确定了分析方法，具有更好的特异性和灵敏性。

五．仪器和设备
仪器： Thermo ScientificTM TSQ 8000 Evo 气相色谱三重四极杆串接质谱仪。
设备：涡旋混合器、离心机、氮吹仪、水浴锅等。
色谱柱： TR-Pesticide II（30 m*0.25 mm*0.25 µm, 带毛细管色谱柱 5 m 预柱）毛细管色谱柱（Thermo Fisher Scientific）。

六．样品前处理
按照 2015 版《中国药典》的方法进行前处理

七．方法包的使用
1. 进样方法使用：直接使用方法包中 meth 结尾的文件（Chinese pharmacopaeia） ，进行进样分析。
不同仪器配置可能稍有不同，可以参考以下方法截图。

2. 数据处理方法建立：直接拷贝方法包中的文件夹 到 C:\TraceFinderData\32\Methods 中，方法就可以直接在 TraceFinder 软件中打开，这个方法包括数据处理方法和进样方法

3. 将步骤 1 中的进样方法拷贝粘贴到 C:\TraceFinderData\InstrumentMethods 中，在 Instrument Methods中选择这个文件，然后保存这个 TraceFinder 的 Master Method。

4. 将按照步骤 1 进样完成的数据文件与 TraceFinder 方法相关联，得到完整的数据处理方法。按需要更改保留时间等参数进一步对数据处理方法进行优化，得到准确的数据处理方法。整个过程无需输入化合物信息，离子对信息，挑选离子对信息找到化合物，所有的步骤均是自动完成，一点即可，极大得提高分析效率，简化方法流程。

最终只需要再输入定量的标准曲线各浓度点和具体浓度即可完成数据处理方法的建立。

八．应用文章

 

《气相色谱串接质谱联用法用于药材中多农残测定》

摘要
为了应对 《中国药典》 2015 版的实施，根据 《中国药典》2015 版 2341 款第四法的要求，本文建立了一种运用三重四极杆气质联用仪（GC-MS/MS）来检测药材、饮片及制剂中部分农药残留量的分析方法。试样加无水硫酸镁、无水乙酸钠后，用乙腈提取，提取液经净化后，氮吹仪浓缩，用乙腈定容。在毛细管气相色谱柱上分离，采用 GC-MS/MS 测定，用外标法定量计算。各化合物按照浓度 5.0、 10.0、 25.0、 50.0、 100.0 µg/L 建立标准曲线， 74 种农药组分在 5.0~100.0 µg/L 浓度范围内线性关系良好，线性相关系数均大于 0.99。按照 IUPAC（国际理论（化学）与应用化学联合会）方法规定计算各组分检出限，各组分检出限在 0.01–2.15 µg/L 之间。结果表明，应用赛默飞世尔科技 TSQ8000 Evo 完全可以应对 2015版 《中国药典》 关于 GC-MS/MS检测药材、饮片及制剂中部分农药残留量的要求。
前言
随着对药材农药残留的报道日益增多，人们对农药残留危害的认识也越来越深入，药典对其制定检测方法也越来越全面，越来越科学。《中国药典》 2000 年版首次规定了 9 种有机氯农药残留的检测方法，之后在 2005 年版的药典中，除甘草、黄芪等药材外，对其余药材均未提出限量要求。 2010 版 《中国药典》 中不仅规定了 9 种有机氯农药残留的检测方法，而且规定了 12 种有机磷类的检测方法，还规定了 3 种拟除虫菊酯农药残留量的检测方法，然而在限量标准方面仅规定了甘草和黄芪两种药物的六六六、滴滴涕、五氯硝基苯的限量标准，其它中药材尚未涉及。最新的 2015 版 《中国药典》 对农残检测进一步作出了详细规定，并首次规定了用 GC-MS/MS 和LC-MS/MS 等技术用于药材中农残检测。历版 《中国药典》对药材农药残留量部分主要变化如表 1 所示：

1.实验部分
1.1 仪器和试剂
质谱仪器： TSQ 8000 Evo 质谱仪（赛默飞世尔科技，美国）；
气相色谱仪： Trace1310 GC 配 AI l310 自动进样器（赛默飞世尔科技，美国）；
色谱柱： TR-Pesticide II 30 m*0.25 mm*0.25 µm 毛细管色谱柱（赛默飞世尔科技，美国）；
试剂：甲苯、丙酮、乙腈，均为色谱纯；
1.2 仪器方法
气相方法：
柱温箱： 60 ºC 保持 1 min，以 30 ºC/min 升至 180 ºC，再以10 ºC/min 升至 300 ºC，保持 5 min。
进样口：不分流进样，不分流时间： 1.5 min；
进样口温度： 270 ºC；载气：恒流， 1.2 mL/min；传输线： 280 ºC
质谱方法：离子源温度为 300 ºC，采用 T-SRM 方法，具体检测离子对如表 2 所示：

1.3 样品前处理
1）样品提取：取供试样品（药材或饮片）粉碎成粉末，称取3 g 样品到 50 mL 离心管中，加入 5 mL 1% 乙酸溶液，涡旋使样品充分浸润、静置。再加入10 mL乙腈震荡混匀，加入 4 g MgSO4、 1 g CH3COONa，在涡旋振荡器上振荡2 min，冰浴中放置冷却 5 min，然后在 5000 rpm 转速下离心 5 min。
2）样品净化：取上清液 8 mL，转移到 15 mL 净化管，净化管中包括 900 mg MgSO4、 300 mg PSA、 300 mg C18、石墨化炭黑 90 mg。旋涡震荡样品 1 min，然后在 5000 rpm转速下离心 5 min。准确取上清液 5 mL， N2 吹仪上于 40 ℃水浴吹干，乙腈定容至 1 mL，直接 GC-MS/MS 分析。
1.4 样品基质溶液
按照 1.3 的程序处理药材样品，得到空白样品的基质溶液。
1.5 标准溶液的配置
1）标准储备液：在十万分之一分析天平上称取每种农药单标化合物 10 mg，加入 10 mL 相应的溶剂（根据不同的化合物加入丙酮、甲苯或者乙腈）溶解，配制成浓度为约 1000 mg/L的溶液。每种单个标准储备液的浓度根据称样量和加入溶剂的体积计算得到。所有单标储备液在 -20℃ 冰箱中冷冻保存。单标储备液的有效期为 6 个月。
2）混合标准中间液：移取适量的单标储备液，用乙腈稀释。中间标准储备液的浓度为10.0 mg/mL。中间标准储备液在-20 ℃ 冰箱中冷冻保存。中间储备液的有效期为 3 个月。
3）工作标准溶液：取适量的混合标准中间液，以空白样品基质液（1.4）依次稀释成浓度为 5.0、 10.0、 25.0、 50.0、 100.0工作标准溶液。
2.2. 实验结果分析
2.1 色谱分离结果
每个化合物 SRM 质谱条件（母离子-子离子-碰撞能量）从TraceFinder 的 CDB 中导出（见表 2），在该条件下运行样品可得到目标物的 SRM 总离子流图见图 1。

2.2 标准曲线线性、检出限及精密度
配置混合标准溶液，各浓度分别为： 5.0、 10.0、 25.0、 50.0、100.0 µg/L 采用上述方法分别进样分析，考察各组分的线性。实验结果表明 74 种农药组分在 5.0~100.0 µg/L 线性关系良好，线性相关系数均大于 0.99, 对同一样品连续进样 6 针， RSD 在0.37%–4.91%之间，重复性良好。按照 IUPAC 方法规定计算各组分检出限，各组分检出限在 0.01–2.15 µg/L 之间，根据本应用方法的前处理，其检出限都满足最新药典对于农残分析检出限的要求（见表 3）。

3.结论
本文参考药典前处理方法，建立了气相串联质谱法（GC-MS/MS）测定药材中的 74 项农残，样品前处理只需要 45 min 即可完成，经快速前处理后，在 TSQ 8000 Evo 三重四极杆仪器上，通过一针分析，在 25 min 内完成分离和检测。以快速的前处理结合赛默飞的 TSQ 8000 Evo 高通量、高灵敏度的三重四极杆仪器，为药材的农残分析带来高效、准确、方便易用的解决方案。