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过滤与层析的完美结合[新品推荐]

—— Mustang系列滤膜

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2017年5月27日 来源:生物通

摘要:

  一提起层析,大家多半想到柱层析。其实,膜层析技术近年来也在慢慢普及。这是以膜介质为基质,偶联相应的化学基团后制成的一种新型的层析介质。Pall的Mustang Q滤膜就是一种强阴离子交换剂,可有效地结合质粒DNA、带负电荷的蛋白质和病毒颗粒。

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在纯化蛋白质时,离子交换层析是最常用的方法之一。它的原理是利用蛋白质在特定pH下的电荷差异。离子交换剂可分为两类:阳离子交换剂,它吸引带正电荷的分子;阴离子交换剂,它与带负电荷的分子相结合。

一提起层析,大家多半想到柱层析。其实,膜层析技术近年来也在慢慢普及。这是以膜介质为基质,偶联相应的化学基团后制成的一种新型的层析介质。Pall的Mustang Q滤膜就是一种强阴离子交换剂,可有效地结合质粒DNA、带负电荷的蛋白质和病毒颗粒。Mustang S滤膜则是一种可有效结合带正电荷的蛋白质和病毒颗粒的强阳离子交换剂。

与柱层析相比,膜层析可带来不少好处。首先,它的流速快,可大大节省工艺时间,从而提高工作效率。Mustang Q(S)滤膜的建议流速在1-4 ml/分钟。更重要的是,这个过程可最大程度避免生物分子的活性损失。大家知道,所有生物分子都有活性。操作的过程越快,生物分子损失活性的可能性越低。

膜层析也特别适合大规模工艺,因为滤膜柱床体积既可以低至0.1 mL,又可以扩大至几升。此外,膜层析也适用于大蛋白(分子量高于250 kd)。对于传统的微珠,孔隙太小,因此大的蛋白质很难进入,只能在表面结合。相比之下,滤膜的性能更加优异,因为大分子的结合和洗脱不受孔径限制,且动态结合能力不容易受到高流速的影响。

对于空间有限的实验室来说,膜层析也大大降低了装置尺寸,节省占地空间和缓冲液消耗。Mustang Q(S)滤器均为一次性使用。也许有人担心价格有点高,不过这样也简化了层析的操作,省略了装柱、再生和清洗的步骤,因此,性价比杠杠的。当然,若希望放大工艺,还可以升级到配备Mustang Q(S)滤膜的囊式过滤器。

在应用方面,Mustang Q滤膜可去除污染物,比如DNA、病毒颗粒、宿主细胞的蛋白质或内毒素。同时,它也是从复杂混合物中分离质粒DNA、病毒或目标蛋白质的理想之选。比如在基因治疗中广泛使用的重组腺病毒,就可以利用Mustang Q滤膜来迅速捕获和纯化。而对于带正电荷的蛋白质和病毒颗粒,Mustang S滤膜则是纯化和浓缩的不二之选。

高效去除内毒素

Mustang系列滤膜除了有Q和S,还有E,这种滤膜可从水、缓冲液、中性糖和某些生物溶液中高效去除内毒素的污染。

内毒素是革兰氏阳性菌细胞壁外膜中的脂多糖(LPS)组分,当细菌死亡时释放。尽管细菌可通过0.2 μm的滤器去除,但LPS对热和pH稳定,因此难以去除或灭活。不过,内毒素是细胞培养的大敌,会影响细胞状态。

目前市场上有不少去除内毒素的产品,但它们往往不能令人满意,或费时费力,需要多个步骤的孵育。有时候,内毒素的彻底去除也伴随着活性物质的损失。好在,人们发现了一个突破口。在pH <2时,内毒素带有负电荷,因此可通过带正电荷的滤膜来去除。带有Mustang E滤膜的Acrodisc滤器正是这样的装置。

这种一次性使用的25 mm直径滤器,可从0.9%的氯化钠溶液中去除500,000 EU的内毒素,特别适合转染用途的质粒制备,也能够降低水、缓冲液、中性糖和某些生物溶液中的内毒素含量。

如此看来,小小的一次性滤器不仅可以在传统的过滤和超滤中发挥作用,还可以帮助我们纯化蛋白质或去除污染物。如此简单、快捷又高效的操作,不正是您想要的吗?Pall不仅单独提供配备Mustang Q或S或E滤膜的Acrodisc滤器,还提供组合套装,包含4个Mustang Q、4个Mustang S和2个Mustang E滤膜,可满足多方面的需求。

欢迎索取Mustang系列滤膜的更多资料>>

生物通 余亮)

(http://www.ebiotrade.com/)
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