用户名:

密 码:

测序 | miRNA | 表观遗传 | 蛋白研究 | 细胞研究 | 免疫学 | 转染 | PCR | qPCR | 核酸纯化 | 基因表达

您所在的位置:首页 > 新技术专栏

生物制药中DNA残留检测——DNA Extractor® Kit

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2017年6月5日 来源:宝柏

摘要:

  尽管残余宿主细胞DNA对治疗性蛋白药物的影响在很大程度上还是未知的,但是也有研究表明宿主细胞DNA可能包含一些有害的DNA片段,使其具有传染性和致瘤性。因此,在生物制药中,对宿主细胞DNA的检测是非常有必要的。

分享到:
  

宿主细胞DNA(Host Cell Proteins)在具有商业规模的生物药品中,治疗性蛋白药物在细胞培养中的表达是一种比较便宜有效的方法。但是这些产品在生产和纯化过程中,很容易引起宿主细胞DNA残余污染。尽管残余宿主细胞DNA对治疗性蛋白药物的影响在很大程度上还是未知的,但是也有研究表明宿主细胞DNA可能包含一些有害的DNA片段,使其具有传染性和致瘤性。因此,在生物制药中,对宿主细胞DNA的检测是非常有必要的。
 
Wako(日本和光纯药)对于生物制药中的宿主细胞DNA残留,可提供以下试剂:DNA Extractor® Kit 【货号:295-50201(50 tests)】

特点:
◆ 可与Threshold系统配合使用进行
◆ 可用于生物制药、血清中的DNA提取
◆ 单独的离心管,无交叉污染。提取的核酸可应用于下游实验
◆ 可获得高质量高回收率的DNA
◆ 使用碘化钠法(Sodium Iodide Method),比传统的方法更为环保
◆ 高灵敏度,可提取低至10 pg的 DNA

DNA Extractor® Kit 实验方案

■ 方案1:血清中DNA 提取操作步骤

试剂准备:
1)DNA 提取之前,试剂预处理如下:
26 ml 碘化钠溶液加入6 ml 蒸馏去离子水稀释,再加入1 ml 月桂酰肌氨酸钠和 65μl糖原溶液并混合均匀。
2)向洗涤溶液(B)加入2 μl糖原溶液并立即混合均匀。

注意事项:
1)用于稀释 Nal 溶液的蒸馏去离子水须去除 DNA。
2)配制好的洗涤溶液(B)在 4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗涤溶液(B),加入糖原溶液到无菌离心管中至合适体积即可。
3)在保存期间 Nal 溶液会结晶,加热溶液至 50℃可帮助溶解。

DNA 提取步骤:
1)吸取 100μl的血清样品加入 1.5 ml 微量离心管;
2)再加入300μl配制好的 Nal 溶液至离心管并混合均匀;
3)将离心管在 60℃恒温容器中加热 15 分钟;
4)取出离心管,加入 400μl异丙醇至离心管并混合均匀;
5)离心管在室温静置 15 分钟后离心 10,000 g 15 分钟;
6)尽可能多地吸取上清液,将离心管倒置在纸面上除去残留溶液;
7)加入 1 ml 配制好的洗涤溶液(B)重悬浮得到的白色沉淀,并使白色沉淀从离心管壁上弹开;
8)短暂离心。10,000 g离心5 min,去除上清液,将剩余沉淀真空干燥,用于后续的 DNA 分析。

■ 方案 2: Threshold* 系统 DNA 定量法的预处理

试剂预处理 :
1)将65 μl 糖原溶液加入26 ml 碘化钠溶液;
2)将2 μl 糖原溶液加入40 ml 洗涤溶液(B),立即混合均匀。

注意事项:
1)用于稀释碘化钠溶液的蒸馏去离子水须去除 DNA。
2)配制好的洗涤溶液(B)在 4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗涤溶液(B),加入糖原溶液到无菌离心管中至合适体积即可。
3)在保存期间碘化钠溶液会结晶,加热溶液至 50℃可帮助溶解。
4)提取步骤应在DNA变性之前,因此重要的是使用无菌技术尽可能降低DNA污染。预先包装好的无菌吸管、无菌试管和手套都要经过此步骤。

DNA 提取步骤:
1)吸取400 μl 或500 μl 的样品加入2 ml 无菌带盖微量离心管并混合均匀;
2)吸取20 μl 的月桂酰肌氨酸钠溶液加入微量离心管并混合均匀;
3)再加入500 μl 包含糖原的碘化钠溶液至混合溶液,涡旋后在 40℃保温 15 分钟;
4)加入900 μl 异丙醇至混合溶液,涡旋后静置于室温15 分钟;
5)短暂离心。10,000 g离心15 min 后,能看见管壁有白色沉淀,吸取上清液后将离心管倒置于纸面去除残留溶液;
6)加入800 μl 洗涤溶液(A)至离心管,剧烈涡旋使白色沉淀从离心管壁上弹开;
7)短暂离心10,000 g 5 min 后,去除残留溶液;
8)加入1500 μl 包含糖原的洗涤溶液(B)至离心管并涡旋,短暂离心10,000 g 5 min后吸取上清液,剩余的白色沉淀包括DNA和糖原载体;
9)加入分析用缓冲液 (Zero Calibrator buffer) 使白色沉淀溶解,用于后续的DNA分析。

注意事项:
请于各步骤使用搅拌器将溶液搅拌均匀。样品溶液里含有 DNA 酶时,进行步骤 2 之前请先进行步骤3。步骤4里样品溶解不完全时,请把保温温度升至40 - 60℃帮助溶解。但是含有部分蛋白(γ- 球蛋白)或高浓度蛋白的样品(> 50 mg/ml),加热可能会导致蛋白聚集。
 
* 为 Molecμlar Devices 公司注册商标,是使用生物传感器的高灵敏度分析装置。

参考文献
1. Ishizawa, M., Kobayashi, Y., Miyamura, T. and Matuura,: Simple Procedure of DNA isolation from human seru Nucleic Acids Res., 19, 5792 (1991)

相关产品

产品编号

产品名称

规格

295-50201

DNA Extractor® Kit

生物制药残余DNA抽提试剂盒

50tests

ADI-900-057

Protein A ELISA kit

蛋白A酶联免疫试剂盒

96wells

了解更多的宿主细胞DNA残留产品

(http://www.ebiotrade.com/)
版权所有,未经书面许可,不得转载

我来说两句(0)

[Ctrl+Enter]

加载读者评论......

相关文章:

    加载相关文章......

今日文章:

    加载今日文章......
    加载中......
    加载中......

技术期刊

GE期刊 | 基因快讯

    加载中......
    加载中......

更多>>

技术大讲堂

分子 | 细胞 | 蛋白 | 其它

    加载中......
    加载中......
    加载中......
    加载中......

更多>>

特价专栏

    加载中......

更多>>

会展信息

    加载中......

更多>>

生物通首页 | 生物通首页 | 今日动态 | 生物通商城 | 人才市场 | 核心刊物 | 特价专栏 | 生物直通车 | 科研交流 | 正牌代理商 | 中国科学人 | 新技术专栏 | 技术讲座

版权所有 生物通

Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved

联系信箱:

粤ICP备09063491号