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1+1>2,转染原代细胞有新招![创新技巧]

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2017年7月18日 来源:生物通

摘要:

  尽管新的转染试剂在不断涌现,一代更比一代强,但面对原代细胞,它们的效果仍然不尽如人意。于是,日本名古屋大学的研究人员做了一个大胆的尝试,将两种知名的转染试剂结合使用,竟然取得了不错的效果。下面,我们就来看看他们是怎么做的。

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尽管新的转染试剂在不断涌现,一代更比一代强,但面对原代细胞,它们的效果仍然不尽如人意。于是,日本名古屋大学的研究人员做了一个大胆的尝试,将两种知名的转染试剂结合使用,竟然取得了不错的效果。下面,我们就来看看他们是怎么做的。

目前,脂质体转染试剂被广泛使用,因为它们使用简便,也不需要特殊设备。不过,这些试剂在原代细胞上的转染效果不佳。为了解决这个问题,研究人员决定组合使用Lipofectamine LTX和FuGENE HD这两种试剂,来转染原代成纤维细胞和成肝细胞。这两种转染试剂分别是赛默飞世尔和罗氏公司的拳头产品。

研究人员从小鼠胚胎中分别获取了原代成纤维细胞和成肝细胞。他们将pRL-CMV质粒转染到细胞内,以检验转染效率。pRL-CMV来自Promega公司,它在CMV启动子的控制下组成型表达海肾荧光素酶。因此,利用双荧光素酶报告基因检测系统可以确定转染效率。

当然,转染效率的提高也不能以细胞死亡为代价。于是,研究人员又利用Promega的CellTiter-Glo细胞活力检测系统来评估细胞活力。他们通过光度计测量仪来测定相对光强度(RLU),以反映荧光素酶活性或细胞活力。

研究结果表明,Lipofectamine LTX和FuGENE HD的结合使用提高了原代成纤维细胞的转染效率。另外,Lipofectamine LTX在购买时还附带了一种Plus试剂。根据说明,在转染过程中添加Plus试剂可提高转染效率。研究人员也尝试着添加Plus试剂,发现转染效率的确有上调。

之后,研究人员又将这种组合应用在原代成肝细胞上。他们发现,尽管转染效率有所提高,但是不如原代成纤维细胞那么显著。此外,与单用FuGENE HD相比,试剂组合的使用降低了细胞活力。为此,他们优化了实验,提高了细胞密度,使得结果改善。

作者指出,脂质体介导的基因转移取决于多个因素,如脂质体/DNA复合物的净电荷和结构。他们推测,Lipofectamine LTX和FuGENE HD的组合也许优化了复合物的形成,故提高了原代细胞的转染效率。不过。这些试剂的化学结构并未公布,因此精确机制仍无法获知。

总的来说,Lipofectamine LTX和FuGENE HD转染试剂的结合使用可提高原代成纤维细胞和成肝细胞的转染效率。若希望进一步提高转染效率,还可以再添加Plus试剂。下次,你也可以试试这种简单的方法哦。(生物通 余亮)

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原文检索

Combinational use of lipid-based reagents for efficient transfection of primary fibroblasts and hepatoblasts

BioTechniques, Vol. 63, No. 1, July 2017, pp. 37–39

(http://www.ebiotrade.com/)
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