细胞消化新时代 [新品推荐]

【字体: 时间:2018年10月22日 来源:默克中国

编辑推荐:

  StableCell™胰蛋白酶溶液是专门设计用来使用类似标准胰蛋白酶的方法进行细胞分离,但不需要分装、冻存、解冻等操作,从而节省大量时间和冰箱空间。

还在进行传统的细胞分离消化吗?
而且胰蛋白酶还要反复的冻存和解冻?

还在使用传统的选择性分离干细胞方法吗?
而且要人工细胞群体筛选或细胞刮铲?

来这里,
节省时间、使用方便的细胞消化工具在向您招手!

冻存胰酶的时代已经过去

细胞消解的方法通常分为酶学方法如使用胶原酶胰蛋白酶Accumax™Accutase等,以及非酶学消化液如EDTA、NO-ZYME™、Non-enzymatic消化液等,其中,胰蛋白酶是由胰腺分泌的一种蛋白水解酶,是实验室中通常的用于贴壁细胞消化的酶。

胰蛋白酶作用于赖氨酸或精氨酸的C末端,在37°C具有最佳的效率,因此预热的胰蛋白酶可以加速细胞分离。然而,传统的胰蛋白酶溶液在较高温度下会自身消化导致酶活性降低,最终导致无效的细胞分离,因此传统胰蛋白酶溶液必须冻存在-20°C储存。

StableCell™ Trypsin溶液-不需冻存的胰蛋白酶

StableCell™胰蛋白酶溶液是专门设计用来使用类似标准胰蛋白酶的方法进行细胞分离,但不需要分装、冻存、解冻等操作,从而节省大量时间和冰箱空间。StableCell™胰蛋白酶溶液推荐储存在2-8°C,但研究结果表明即使储存在37°C也能保留90%以上的酶活和性能。

StableCell™胰蛋白酶溶液已被证实可用于多种细胞类型,比如SKOV-3、DU145、HEK293、16HBE41o-, HL-1和MDCK细胞系等,并具有与Merck标准胰蛋白酶同等出色的表现。

特点和优势:

• 节省时间:不需要分装和反复冻融操作
• 存储方便:2-8°C储存,未使用材料可简单储存在冰盒中
• 优良品质:GMP质量管理体系下生产

 
2-8°C储存的StableCell仍可保持较高活性

 
StableCell具有出色的细胞解离效果

干细胞传代新突破

然而,人类多能干细胞(包括ES和iPS细胞)传代相关的常见问题是不需要的自发细胞分化,没有人工干预的情况下,分化的细胞增殖迅速并最终减少干细胞培养的总体质量。

干细胞解离的传统方案多采用温和的解离试剂,比如Dispase II、Accutase或Accumax。但这些传统的方法具有含动物源组分、批间一致性较差、需要ROCK抑制剂等缺点,具有应用局限性,依然无法很好的解决干细胞传代存在的问题。

EZ-LiFT™干细胞传代试剂:选择性分离干细胞

EZ-LiFT™干细胞传代试剂是一种专利的不含酶、化学成分限定的干细胞解离试剂,该试剂只选择性传代未分化的多能干细胞,避免人工细胞群体筛选或细胞刮铲的步骤,从而不需要使用ROCK抑制剂即可产生高细胞活性。EZ-LiFT™还可以拯救高度分化的iPS细胞培养物。

不同解离液特性对比

Dispase II

Accutase/Accumax

EZ-LiFT Reagent

机制

酶学

酶学

非酶学

组分

基于细菌,不限定

基于动物,不限定

无动物源,成分限定

传代方法

聚集

单个细胞

小的聚集

推荐比例

1:6*

1:30*

1:30*

多能细胞富集

No

No

Yes

细胞存活

++

++

+++

铺板一致性

Low

High

High

批间差异性

Med

Low

Low

需要ROCKi

No

Yes

No

膜蛋白损伤

High

Med

Low

冻存(管/孔)

1 vial

2 vials

5 vials

转染即用

No

Yes

Yes

 

 
使用不同干细胞解离试剂时人类iPS细胞的形态

 
EZ-LiFT™试剂选择性分离和传代未分化的细胞人类iPS

 
EZ-LiFT™试剂可以拯救高度分化的人ES/iPSC培养物

细胞消化技巧和问题解决

细胞消化是细胞研究实验室中非常基础和关键的实验操作,但要想成为专家却并不容易。在实际操作过程中,你可能会遇到各种奇葩的问题,因此,事先掌握一些技巧和经验积累至关重要。

细胞消化troubleshooting:

问题

可能原因

建议方案

细胞难以脱离培养瓶

  胰蛋白酶活力不足或浓度较低

  血清抑制了胰蛋白酶活性

  高汇合度和酶不能进入细胞基质的界面

  使用新鲜批次的酶和最佳的浓度

  彻底清洗移除血清

  在低细胞浓度时解离细胞

细胞粘附困难

  使用高浓度胰蛋白酶

  胰蛋白酶灭活不完全

  附着因子及血清不足

  污染

  柠檬酸降低钙的可用性和减少细胞附着

  细胞膜损伤

  使用最佳浓度的胰蛋白酶和较短的时间

  添加血清以灭活胰蛋白酶

  使用抗生素挽救培养物,如果14天后未清除污染,就可以丢弃受感染的细胞。

  清除或减少柠檬酸的使用

  避免长时间暴露于胰蛋白酶。存储培养基和培养系统远离荧光灯减少自由基的毒性作用

细胞剥离存活率低

  污染

  附着因子及血清不足

  高汇合度细胞

  氧化应激引起圆起和脱离基质

  胰蛋白酶溶液的渗透性(pH)的改变

  丢弃污染的细胞

  添加合适的附着因子及血清

  分裂和传代细胞

  添加白蛋白、谷胱甘肽减小氧化应激

  检测胰蛋白酶溶液的pH

细胞分离后结块

  使用高浓度的胰蛋白酶

  过度吹打

  剧烈和较长时间的离心

  单培养层的年龄增加

  使用最佳浓度的胰蛋白酶

  小心轻微吹打

  轻柔离心(125g离心10分钟)

  达到100%汇合度之前分裂和传代细胞

细胞膜损伤和死亡

  脂质过氧化作用增加降解细胞膜引起细胞分离

  无血清培养基中缺乏血浆铜蓝蛋白促进羟基自由基的形成和破坏细胞膜

  铁浓度增加支持细胞表面的自由基活性和破坏细胞膜

  增加解决方案支持自由基活动在细胞表面和破坏细胞膜

  过氧化氢在亚铁和亚铜离子存在时形成羟基自由基

  光分解核黄素形成过氧化氢

  氧化物、过氧化物、碳酸盐、羟基、磷和硫离子的存在形成沉淀丧失锌

  添加抗坏血酸盐和谷胱甘肽捕获脂质过氧化作用

  配方中包括白蛋白及谷胱甘肽减少氧化损伤

  使用传递系统隔离铁转移到细胞内

  培养基中包括甘露醇/丙酮酸复合物稳定过氧化氢

  细胞培养基中添加新鲜核黄素,避免细胞培养系统长时间暴露于光照

  添加、-白蛋白/胰岛素复合物减少氧化应激,防止形成过氧化物和硫化物

想了解更多细胞培养技术和技巧,欢迎索取完整的最新版本《细胞培养研究指南》,点击我要指南获取:

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