如何选购凝胶成像系统,专家教你三招[选购宝典]

【字体: 时间:2018年02月13日 来源:生物通

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  跑了一块漂亮的胶,这当然是件值得高兴的事,但还不够,您需要一台凝胶成像系统,来帮助分析凝胶所包含的信息。于是,凝胶成像系统应运而生。如何选择一台功(jing)能(ji)强(shi)大(hui)的凝胶成像系统,让我们听听专家的建议。

跑了一块漂亮的胶,这当然是件值得高兴的事,但还不够,您需要一台凝胶成像系统,来帮助分析凝胶所包含的信息。于是,凝胶成像系统应运而生。如何选择一台功(jing)能(ji)强(shi)大(hui)的凝胶成像系统,让我们听听专家的建议。

在被问到凝胶或印迹成像系统的关键功能时,Bio-Rad的资深科学家Kevin McDonald列出了三条:自动成像;应用灵活;一致性好,如果需要定量的话。其他的专家基本同意McDonald的观点,并补充了一些。结合这些专家的建议和实验室的需求,相信您一定能买到一台称心如意的系统。

操作更轻松

McDonald认为,有了自动化成像,“即使是新手或非专家的用户,也能获得高质量的图像。”如今,凝胶成像的用户群不断扩大,实验室里充满新生力量,这项功能无疑派得上用场。

加州大学戴维斯分校的助理教授Aldrin Gomes表示:“大多数的凝胶成像系统的用户都不是专家。因此,这些平台应当提供简单而准确的计算机程序,以协助分析和编辑数字图像。”

目前,许多凝胶成像系统已经具备自动曝光、对焦和缩放功能,可实现一键式的图像采集。康宁生命科学的产品经理Ira Augenzucker认为,凝胶成像系统的关键特性之一是“使用简单,维护轻松”。

应用更广泛

“随着检测试剂的选择越来越多,一台系统应当满足科学家的需求,实现实验室中的各种成像应用,”McDonald解释说。“这对于Western blot而言尤为重要,因为多重检测正变得更普及,它能够减少样本量的需求,在提高通量的同时实现更准确的数据定量。”

Gomes也同意McDonald的观点。“凝胶成像系统应该是多功能的。它们需要能成像丽春红、考马斯蓝、荧光染料和化学发光试剂,”他说。在最有用的平台上,科学家可以开展多重检测。正如Gomes所言,“两个或更多的荧光检测模块特别适合磷酸化和非磷酸化蛋白的检测。”

同时,多功能性不仅仅是指检测对象的内容,还包括检测对象的大小。Gomes指出,多功能性也意味着“它可以应对各种大小的印迹,从很小的到很大的印迹。”如今的许多凝胶成像系统都适用于mini、midi等各种规格的凝胶或印迹膜。

当您考虑购买一台凝胶成像系统时,灵活性应是首先要考虑的东西。“如今的实验室设备需要具有多功能性,并且能够扩展到新的应用,”Azure Biosystems营销副总裁Lisa Isailovic说。“凝胶成像系统的一个关键要素是能够升级到新的应用,比如化学发光的Western、近红外的Western及其他荧光应用。这样,一个基因组学的系统就迈入了蛋白质组学的世界。”

Gomes也同意这种说法。他希望,系统能够从一个成像平台(如化学发光)升级到另一个平台(如荧光)。“用户通常不知道他们需要什么样的凝胶或印迹成像系统。”

Gomes指出,化学发光和荧光检测模式各有优缺点。例如,荧光能够实现多重检测,且动态范围比化学发光更好,而红外荧光的灵敏度与化学发光相当,甚至更好。不过他也列出了荧光的一系列缺点,包括荧光信号的强度捉摸不定,这取决于探针的来源,以及成像仪的价格可能更高一些。

对于化学发光检测,Gomes列出了许多优点,包括增强型化学发光(ECL)的灵敏度要高于非红外的荧光基团,以及更多实验室对化学发光成像仪比较熟悉。当然,这种方法也有缺点,比如信号强度通常只能持续几个小时,无法进行多重检测,除非剥离抗体。

定量的结果

过去,凝胶电泳只能带来定性信息,但许多科学家希望将其用在定量应用中。“Western blot通常被认为是半定量的检测,”McDonald说。“不过,定量的Western blot则是非常理想的。”

为了收集可定量的数据,McDonald认为,整个印迹区域内捕获的图像必须提供均一的数据。“如果目标蛋白的图像不均一,那么即使用看家蛋白或总蛋白来标准化,结果也没有任何价值,”他说。

Gomes则认为:“成像系统必须具有高灵敏度。新的CCD照相机带来了高的灵敏度和宽的动态范围。在我看来,X光胶片成像往往带来了无法重复的结果,因此不能用于定量。”不过,他指出化学发光特别是荧光带来了最佳的动态范围。

Augenzucker最后补充说,凝胶成像系统应当快速轻松地捕获各类凝胶的图像,并以各种形式存储,便于打印和发表。他举了个例子:“我们一般在30秒内获得bmp、jpg或tiff格式的图像,且Windows系统支持各种打印选项。”

正如各位专家所提到的,如今的凝胶或印迹成像系统比以往更加易用,也具有更多的高级功能。有了这样的系统,大家只需要少量的蛋白、少量的一抗和二抗,就能获得重复性更好的结果,实现更准确的定量。

(作者:Mike May / 生物通编译)

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