Promega凋亡新品上市，实时监测凋亡进程[新品推荐]

在凋亡检测过程中，人们经常使用经典的Annexin V/PI双标法。在正常细胞中，细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（PS）位于胞浆侧，无法与Annexin V结合。随着细胞凋亡发生，PS外翻，可用荧光标记的Annexin V检测。凋亡末期，细胞膜结构受损，原本不透膜的核酸染料（如PI、7-AAD等）也能进入细胞，从而产生信号。

不过，这种方法费时费力，也无法对凋亡进程进行实时监测。为此，Promega推出了一种新产品RealTime-Glo™ Apoptosis and Necrosis Assay，可以轻松地实时检测凋亡进程。无需处理多块多孔板，也没有复杂的处理过程和特殊的检测仪器。只需要具有发光和荧光检测功能的多功能读板仪即可。

这项检测是基于NanoLuc Binary Technology（NanoBiT）技术，通过简单的发光信号来检测Annexin V 结合，并通过荧光信号的检测来测定坏死。它使用了2个Annexin V融合蛋白，它们带有互补的NanoBiT萤光素酶亚基（Annexin V-LgBiT 和Annexin V-SmBiT）。当PS外翻与Annexin V融合蛋白结合时，两个互补亚基相互接近形成有功能的萤光素酶而产生发光信号。

健康细胞

PS在细胞内侧
细胞膜完整
发光（RLU）阴性
荧光（RFU）阴性

早期凋亡

PS外翻
细胞膜完整
发光（RLU）阳性
荧光（RFU）阴性

继发性坏死

PS在细胞内侧和外侧
细胞膜受损
发光（RLU）阴性
荧光（RFU）阳性

特点：

▪ 持续监测细胞状态的变化：此方法可在化合物处理细胞时，重复测定同一孔的不同时间点的发光和荧光信号来确定化合物的效力，比终点法使用更少的多孔板和检测试剂。
  ◦ 适用于多种类型的培养细胞。
  ◦ 可实时检测剂量依赖和时间依赖的凋亡进程。
  ◦ 可与其他检测试剂叠加使用，从而获得更多的毒性发生机制的信息。
▪ 多孔板检测，检测通量可放大：由于试剂直接添加到培养细胞中，因此可以在微孔板中进行检测，无需要繁琐的清洗或处理步骤。
▪ 操作简单：简单地将检测试剂加入多孔板，然后反复读取即可。

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