别光顾着上流式,给细胞照张相吧[新品推荐]

【字体: 时间:2018年04月02日 来源:生物通

编辑推荐:

  在传统的流式分析中,细胞只是散点图上的一个点,而不是真实的细胞图像,缺乏形态、结构等多方面的信息。于是,流式和成像相结合的技术应运而生,这就是成像流式细胞术(iFC)。

利用传统的流式细胞检测技术,研究人员可以分析成千上万个细胞,获得荧光信号的数据。然而,细胞只是散点图上的一个点,而不是真实的细胞图像,缺乏形态、结构等多方面的信息。于是,流式和成像相结合的技术应运而生,这就是成像流式细胞术(iFC)。

Wojciech Wojciechowski是罗切斯特大学流式细胞仪共享资源实验室的科学主管。他正利用默克的Amnis成像流式细胞仪Image Stream-X来开展流式分析。“每当实验需要大量数据点的分析,同时又需要某种空间分布的参数(比如特定目标的位置),成像流式细胞术就是最佳选择,”他说。

这项技术有许多潜在的应用。例如,北卡罗来纳大学流式细胞仪核心实验室技术主管Sébastien Coquery指出,iFC可以“用于研究探针共定位、内化(如药物摄取或吞噬作用)、细胞间相互作用、细胞 周期和细胞死亡,以及形态/形状变化等”。

同时,它也可以用来搜索样本,发现那些罕见的目标。正如华盛顿大学生物工程系的David Basiji教授所说,iFC可以“发现和鉴定很罕见的细胞,且假阳性率低”。

好处还不止这些。BioLegend的业务经理Kelly Lundsten认为,iFC可以测定蛋白质的表达量。“假如你的蛋白表达绿色荧光蛋白并且定位于脂筏,但是当转运蛋白或通道被阻断时,表达水平不会改变,但定位会改变,可能弥漫在细胞质中。这时需要连续开展显微镜和流式分析,而iFC则一举两得,”她说。

分析选项

与大多数实验室设备一样,iFC的价值如何,取决于系统的分析能力,也就是软件工具。业内人士指出,样本的许多参数都可以自动确定。

Fluid Imaging Technologies的总裁Kent Peterson 表示:“利用适当的软件,如Fluid Imaging的Visual Spreadsheet,可以将不同类型的细胞分类。例如,模式识别算法可根据用户定义的参数来区分、分类和匹配微粒。”

不过,一些实验则不需要iFC。“在分析几乎同质的细胞或微粒时,不需要iFC,因为形态分析并不是必需的,”Peterson解释说。在这种情况下,重要的数据是指微粒或细胞的大小、分布和荧光。

Basiji补充说:“如果细胞在组织内的分布模式是对你有用的信息,那么建议采用更传统的显微镜方法,因为将细胞放在溶液中会牺牲背景信息。如果你需要在亚微米水平观察细胞形态,并愿意放弃速度和统计学意义,建议使用共聚焦或超分辨率显微镜。”

关键是让技术来适应问题。“所有的平台和分析都应当根据生物学的问题来选择,而不是相反,”Lundsten说。“你永远不会让你的问题去适合一个特定的平台。”

Wojciechowski提到的应用是细胞间相互作用。“在研究不同类的细胞间突触时,我们采用这种分析方法,”他解释说。具体例子是细胞毒性淋巴细胞和癌细胞之间的连接。“利用iFC,我们可以确定特定细胞是否连接并形成实际的突触,抑或只是偶然的彼此靠近。这也可用来研究各种免疫细胞与血小板或其他小囊泡的相互作用,”他说。

选购指南

也许您需要一张表格,来列出所有必备的功能。Peterson建议:“在选购iFC平台时,最重要的考虑因素是准确性、重复性和易用性。考虑仪器和图像分析的算法是否匹配,这也很重要。”

Coquery也指出了买家需要考虑的一些因素,包括:

  • 硬件功能:激光器数量、检测器数量、捕获速度、计算机性能
  • 软件功能:用户友好、统计功能、供应商的升级速度
  • 价格
  • 大小

充分利用iFC的多功能性,这也值得考虑。 Lundsten认为客户应该得到一台可以实现多重检测的平台。“你仍然能够像普通流式细胞仪一样使用所有相同的荧光或参数,”她说。 另外,她指出应该考虑灵敏度和亚细胞分辨率限制。

飞跃进步

近年来,iFC技术在快速发展,研究人员若稍不留意,就可能错过最新进展。

“我们最新的油浸式纳米成像流式细胞仪能够检测低至50纳米的微粒,”Peterson说。 “通过油浸式显微镜,蓝光LED以及更高性能物镜的独特组合,FlowCam Nano能够对纳米大小的微粒进行检测和成像。”

人们对纳米微粒的兴趣日益浓厚,也推动了iFC在这一领域的应用。“由于其独特的实时成像和鉴定纳米微粒的能力,FlowCam Nano代表着向前迈出一大步,”Peterson解释说。“荧光检测与形态鉴定的结合将为研究人员提供产品开发,过程监测和质量控制的新工具。”

即使iFC已经有了如此多的改进,但这项技术仍然有进步的空间。 例如,Basiji认为,人们最期待的是生产出成像流式分选仪。”

这么多的技术进步也许让研究人员眼花缭乱,在应用时无从选择,不过有一点是毋需置疑的。“当你需要对形态进行鉴定和分类时,你就应该使用成像流式细胞仪,”Peterson说。

(作者:Mike May / 生物通编译)

我来说两句
0  条评论    0 人次参与
登录 注册发布
最新评论刷新
查看更多评论 > >

订阅生物通快讯

订阅快讯:

最新文章

限时促销

会展信息

关注订阅号/掌握最新资讯

生物通首页 | 今日动态 | 生物通商城 | 人才市场 | 核心刊物 | 特价专栏 | 仪器龙虎榜

版权所有 生物通

Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved

联系信箱:

粤ICP备09063491号