活细胞ICC：实时捕获活细胞中的蛋白表达变化

　　

免疫细胞化学（ICC）是一种基本的细胞成像技术，已经成为每位细胞生物学家的保留节目。将荧光标记的抗体加入固定的细胞，可以观察细胞中的蛋白表达。不过，尽管传统的ICC能够提供蛋白定位的信息，但它无法捕获蛋白表达随时间的变化。

如今，人们不仅需要空间分辨率，还需要时间分辨率，以揭示细胞状态以及细胞间的相互作用，这些现象都无法在固定细胞中观察到。于是，Essen BioScience最近推出了IncuCyte®活细胞免疫细胞化学分析，在保留ICC优势的同时，能够捕获活细胞中的动态。

	传统的免疫细胞化学	活细胞免疫细胞化学
数据点	固定细胞上的单个时间点	数小时或数天内的多个时间点
操作时间	固定、洗涤和染色操作，需要几个小时	混合而无需洗涤的操作只需一小时，接着是自动成像
细胞状态	死细胞或濒死细胞	活细胞

IncuCyte平台上的活细胞ICC利用了仪器的活细胞分析功能，再结合传统的荧光标记抗体。通过一种简单的“只需混合而无需洗涤”方案，首先利用荧光标记的抗原结合片段对抗体进行标记，然后将其直接加入活细胞中。若担心背景信号，可以加入背景抑制剂IncuCyte Opti-Green。

整个过程抛弃了原先的洗涤步骤，让IncuCyte在数小时或数天内自动拍摄图像，使得实验能够更加高效地开展。据Essen BioScience的欧洲总监Tim Dale介绍，IncuCyte的自动成像和分析让实验能在96孔板中开展。“整个流程适合更高通量的研究。”同时，检测抗体也可以自由选择，只需要用染料轻松标记。

有了活细胞ICC，您收获的不再是固定细胞中的单个数据，而是活细胞中的表达动态。更重要的是，与IncuCyte的许多功能结合使用，您在了解蛋白表达变化的同时，还能考察细胞的形态和功能。

Essen BioScience的首席科学家Nicola Bevan及其团队早前开展了一项概念验证研究。他们在两种单核细胞分化模式后测定了巨噬细胞标志物的变化。他们观察到蛋白表达随时间而增加以及两者之间的明显差异。此外，蛋白表达谱可能还与巨噬细胞的吞噬潜能有关。

之后，研究团队还利用活细胞ICC监控了肿瘤细胞和免疫细胞之间的相互作用。他们将表达RFP（红色）的肺癌细胞与用荧光抗体标记CD45（绿色）的免疫细胞共同培养。 IncuCyte分析软件围绕RFP信号创建了扩展的图像掩模。通过量化红色（肿瘤细胞）和绿色（免疫细胞）信号的重叠，可以测定两种细胞之间的相互作用。

“这些例子表明，活细胞ICC解决方案能够从时间上监控细胞过程，无论是蛋白表达、细胞健康还是细胞功能，都能够为细胞生理学、病理生理学以及药物作用的潜在机制提供见解，”Tim解释说。“任何调控细胞功能的东西都可以从时间分析中受益。”

此外，自动化的活细胞成像也为您带来了更加丰富的实验数据。您能够监测细胞增殖、监控细胞凋亡，监测药物对细胞的影响等等。同时，检测工作也不必都安排在工作日，IncuCyte可以24小时不休息，实时记录结果。总之，与传统的免疫细胞化学检测相比，IncuCyte活细胞ICC方案能够让您更加轻松地获取更多信息。（生物通 薄荷）