文献选读:成像流式细胞术的应用[创新技巧]

【字体: 时间:2018年08月21日 来源:生物通

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  尽管流式细胞术(FC)能够可靠地评估细胞表面和细胞内标志物的表达,从而对细胞亚群进行分组,但它不提供蛋白定位的任何信息。成像流式细胞术(IFC)结合了两种高内涵的单细胞鉴定技术,扩展了传统流式细胞术的应用范围。

Hritzo MK, Courneya JP, Golding A. Imaging flow cytometry: a method for examining dynamic native FOXO1 localization in human lymphocytes. J Immunol Methods 2018; 454:59–70.

尽管流式细胞术(FC)能够可靠地评估细胞表面和细胞内标志物的表达,从而对细胞亚群进行分组,但它不提供蛋白定位的任何信息。成像流式细胞术(IFC)结合了两种高内涵的单细胞鉴定技术,扩展了传统流式细胞术的应用范围。

成像流式细胞术通过对单细胞放大20倍、40倍或60倍来收集每个细胞的数字图像。图像内容可由多达10条荧光通道以及明场和暗场图像来收集。通过观察流式细胞术所收集的亚群背后的细胞内容,可以更充分地鉴定细胞表型。

近日,美国巴尔的摩退伍军人事务医院和马里兰大学医学院的Amit Golding等人在《Journal of Immunological Methods》杂志上发表文章,应用成像流式细胞术来鉴定转录因子Forkhead box O1(FOXO1)的细胞内定位。

作者首先建立了一个模型系统来监控人淋巴瘤细胞系HuT102中的FOXO1。通过传统的细胞组分分离和Western blott方法,作者发现这个模型能够检测到FOXO1的定位。在细胞未经处理时,它主要位于细胞核中。之后利用佛波酯/离子霉素(PMA/I)处理,FOXO1的表达逐渐转移到细胞质。而Akt VII抑制剂的处理可逆转这种作用。

然而,这种方法的每个条件都至少需要3x106个细胞,才能准确了解蛋白定位,并且它本身无法解析异质性的细胞群。考虑到这些限制,作者认为成像流式细胞术可能是一种更好的替代方法。

在此,他们利用Amnis Imagestream Mark II成像流式细胞仪(默克公司)和40倍物镜来收集每个样品的10,000个细胞数据。他们利用活细胞/死细胞染料来分离活细胞,利用DAPI来鉴定细胞核,并利用CD4受体检测抗体以及细胞内染色来确定FOXO1的定位。

作者通过计算皮尔森相关系数,利用DAPI和FOXO1的信号来产生相似性得分,表明FOXO1主要定位在细胞核。这一基线建立后,作者开展PMA/I处理、AKT VII抑制剂处理或两者叠加处理,并再次鉴定FOXO1的定位。然后利用人外周血单核细胞来观察PMA/I处理对CD4和CD8细胞群的作用。

总之,这些结果表明成像流式细胞术是确定FOXO1定位的可靠系统。与其他成熟方法相比,它需要的细胞量比较少,并且能够在单细胞亚群中定位FOXO1的表达。这对于淋巴细胞减少症的患者来说至关重要。此外,这种技术可在384孔/1536孔板中实现许多高通量的应用。(生物通 薄荷)

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