AAV载体浓缩试剂，轻松解决给药剂量受限难题！

　　

腺相关病毒（AAV）载体可用于将基因导入至任意分裂/非分裂细胞中，特别是可以在非分裂细胞中实现基因长时间表达。另外，它免疫原性低，适合作为动物个体基因导入（体内转导）工具。 不同动物个体AAV载体的剂量取决于目标动物类型和给药方法。如果研究对象是小鼠等，由于动物个体本身很小，给药剂量受限，因此制备高浓度AAV载体是非常有必要的。

在AAV载体制备和纯化的过程中，可能需要浓缩病毒颗粒或者置换缓冲液。

AAVpro Concentrator是一种可以轻松高效地浓缩AAV载体的试剂，可用于多种目的，例如浓缩AAV载体培养上清液（有无血清均可）或者置换AAV载体溶液的缓冲液。

更简便的操作流程，无需超速离心，手动操作时间不到一个小时。AAVpro Concentrator使用标准离心机即可轻松有效地浓缩AAV载体。与仅涉及AAV颗粒沉淀的其他浓缩方法相比，AAVpro Concentrator操作过程中包含了过滤和超滤步骤，可以产生更高纯度的AAV载体。而混合-离心的操作流程适用于各种起始量，易于扩展浓缩规模，并且手动操作时间不到一个小时。右图展示了使用AAVpro Concentrator浓缩AAV载体的操作流程。

有效回收高度浓缩的AAV载体，浓缩倍数可达到95倍，回收率大约为∽48%。AAVpro Concentrator可用于从细胞培养液中浓缩任何血清型AAV载体，AAV载体的制备可以使用Takara Bio的任意AAV系统。使用AAVpro Concentrator，将产生携带荧光蛋白质ZsGreen1的AAV1载体细胞培养上清液，从40 ml（1个T225培养瓶量）浓缩至200 μl。 然后，使用AAVpro Titration Kit (for Real Time PCR) Ver.2（Code No. 6233）测定滴度，并确认回收率。经检测，浓缩倍数可达到95倍，回收率大约为∽48%（下图1）。

流式细胞术检测结果显示，浓缩后的AAV载体可以有效保持其感染性。我们通常通过生物学分析方法来检测所制备的AAV载体的感染性滴度，使用AAV载体感染允许细胞(permissive cell)并测定转基因表达量，确定转导单位（TUs）。使用浓缩前后的AAV1-ZsGreen1载体，感染HT1080细胞来评估感染性滴度。以5,000 vg/细胞和500 vg/细胞的AAV载体感染HT1080细胞，并在3天后通过流式细胞术进行分析。结果证明，使用AAVpro Concentrator浓缩后的AAV载体仍然保持其感染性。以MOIs为5,000或500的浓缩后AAV载体感染靶细胞，其感染效率分别为44.7％或9.2％（下图2）。

图1：从无血清培养上清液中浓缩AAV载体      图2：评估浓缩后AAV载体的感染性

（以上图片来源于Takara Bio USA, Inc.）

与超速离心相比，AAVpro Concentrator具有非常高的用户友好度：易于操作，手动操作时间更短，使用实验室常规仪器就可以完成。在具有高用户友好度的同时，浓缩效率也非常值得期待：将40 ml培养液上清浓缩至200 µl，AAV载体滴度可提高95倍，回收率约为48％，操作过程中所包含的过滤和超滤步骤可以去除可能干扰下游应用的杂质。从应用上来讲，AAVpro Concentrator可用于浓缩含或不含血清的培养上清液，也可用于缓冲液交换。

使用AAV载体开展研究的您，还在为复杂而繁琐的AAV载体浓缩而烦恼吗？有了AAVpro Concentrator，省心应对AAV载体浓缩，轻松解决给药剂量受限难题！

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