韩春雨、高峰发表新论文，报道新型活细胞RNA成像工具

　　

RNA功能繁多，近年来备受关注。可视化活细胞中的分离RNA可以提示它的基本功能。目前主要有两种活细胞RNA成像系统：MS2系统和Cas13a系统。韩春雨团队在BioRxiv上发表的新文章，报道了一种基于CasE的新型活细胞RNA追踪成像工具。

CasE是I-E型CRISPR/Cas系统的核心组件，它绑定特定的茎环区域（即CasE结合位点，CBS）独自加工前体crRNA，形成成熟的crRNA。CasE的保守His20参与催化活性，其突变版本“ΔHis26-TtCse3”使CasE失去催化活性，但仍能与其靶标结合，两个版本在HEK293T亚细胞结构中都均匀表达。利用这些特点，韩春雨团队将split Venus荧光蛋白连接到dCasE（即“ΔHis20）的N和C端，组合成一个实时活细胞RNA追踪工具——VN-dCasE-VC，该工具仅在目标RNA存在时才发出荧光，可提高信噪比。

为了测试新RNA追踪系统，他们使用VN-dCasE-VC捕捉哺乳动物细胞中的β-肌动蛋白的过表达，同时以MS2系统作为对照。两个系统在相同的定位报道了β-肌动蛋白mRNA，但是与在细胞质中发出强烈荧光的VN-dCasE-VC相比 ，MS2系统的图像则较为模糊。研究人员推测，可能是MS2衣壳蛋白（MCP）限制了其与靶mRNA的结合。

研究人员观察到，测试下每个mRNA分子仅需添加2x的CBS就可以检测出过表达的β-肌动蛋白mRNA，如果向靶mRNA分子中添加更多CBS还可以进一步改善荧光信号，他们预测，新工具将能通过增加CBS数量，从而有助于检测低丰度mRNA。

利用VN-dCasE-VC，他们还发现了一个有趣的现象，H1启动子转录的2x CBS RNA主要分布在细胞核，而CMV启动子转录的16x CBS RNA主要分布在细胞质。提示RNA长度或启动子类型可能影响RNA的亚细胞定位。

关于韩春雨团队的新发现，大多数网友持观望态度。魏茨曼科学研究学院致力于蛋白质和mRNA在真核细胞中定位研究的Gal Haimovich说：“（韩的这项发现）值得检验，尽管他没能演示单分子。”

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原文检索：Background free tracking of single RNA in living cells using catalytically inactive CasE

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（生物通：伍松）