韩春雨、高峰发表新论文,报道新型活细胞RNA成像工具

【字体: 时间:2019年07月22日 来源:生物通

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  韩春雨团队在BioRxiv上发表的新文章,报道了一种基于CasE的新型活细胞RNA追踪成像工具。

  

RNA功能繁多,近年来备受关注。可视化活细胞中的分离RNA可以提示它的基本功能。目前主要有两种活细胞RNA成像系统:MS2系统和Cas13a系统。韩春雨团队在BioRxiv上发表的新文章,报道了一种基于CasE的新型活细胞RNA追踪成像工具。

CasE是I-E型CRISPR/Cas系统的核心组件,它绑定特定的茎环区域(即CasE结合位点,CBS)独自加工前体crRNA,形成成熟的crRNA。CasE的保守His20参与催化活性,其突变版本“ΔHis26-TtCse3”使CasE失去催化活性,但仍能与其靶标结合,两个版本在HEK293T亚细胞结构中都均匀表达。利用这些特点,韩春雨团队将split Venus荧光蛋白连接到dCasE(即“ΔHis20)的N和C端,组合成一个实时活细胞RNA追踪工具——VN-dCasE-VC,该工具仅在目标RNA存在时才发出荧光,可提高信噪比。

为了测试新RNA追踪系统,他们使用VN-dCasE-VC捕捉哺乳动物细胞中的β-肌动蛋白的过表达,同时以MS2系统作为对照。两个系统在相同的定位报道了β-肌动蛋白mRNA,但是与在细胞质中发出强烈荧光的VN-dCasE-VC相比 ,MS2系统的图像则较为模糊。研究人员推测,可能是MS2衣壳蛋白(MCP)限制了其与靶mRNA的结合。

研究人员观察到,测试下每个mRNA分子仅需添加2x的CBS就可以检测出过表达的β-肌动蛋白mRNA,如果向靶mRNA分子中添加更多CBS还可以进一步改善荧光信号,他们预测,新工具将能通过增加CBS数量,从而有助于检测低丰度mRNA。

利用VN-dCasE-VC,他们还发现了一个有趣的现象,H1启动子转录的2x CBS RNA主要分布在细胞核,而CMV启动子转录的16x CBS RNA主要分布在细胞质。提示RNA长度或启动子类型可能影响RNA的亚细胞定位。

关于韩春雨团队的新发现,大多数网友持观望态度。魏茨曼科学研究学院致力于蛋白质和mRNA在真核细胞中定位研究的Gal Haimovich说:“(韩的这项发现)值得检验,尽管他没能演示单分子。”

延伸阅读:韩春雨论文NgAgo技术最新进展:作者主动撤回 期待更多成果

原文检索:Background free tracking of single RNA in living cells using catalytically inactive CasE

索取Thermo Scientific Exactive GC Orbitrap GC-MS系统资料,帮助食品安全,环境,工业,法医和反兴奋剂领域的科学家将实验分析能力提升到更高水平

(生物通:伍松)

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