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科学家聚焦ddPCR技术在血液病监测中的作用

【字体: 时间:2020年01月10日 来源:生物通

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  以下是一些应用实例,展示了如何利用ddPCR来监测毛细胞白血病患者和慢性粒细胞白血病患者。有时,人们必须检测低水平的生物标志物,以便尽早确定患者是否响应治疗方案。

在上个月举行的2019年美国血液学会年会上,来自世界各地的科学家发表了40多篇摘要,突出了Bio-Rad的微滴式数字PCR(ddPCR)技术的应用。这些研究展现了ddPCR的敏感性、精确性和时效性,这些特点让研究人员能够经济高效地监测血液病的生物标志物。

以下是一些应用实例,展示了如何利用ddPCR来监测毛细胞白血病患者和慢性粒细胞白血病患者。有时,人们必须检测低水平的生物标志物,以便尽早确定患者是否响应治疗方案。

ddPCR vs. PCR

意大利博洛尼亚大学的Pier Luigi Zinzani教授和Alessandro Broccoli博士在演讲时称,他们希望找到一种更敏感的检测方法,以确定毛细胞白血病(HCL)患者是否响应cladribine治疗。利用ddPCR技术,他们发现与完全缓解的患者相比,病情活跃患者的BRAF V600E ctDNA丰度更高。

研究人员利用ddPCR技术来检测10例毛细胞白血病患者的外周血中是否存在此突变,这些患者在多年前接受cladribine治疗并完全缓解。他们发现7例患者为BRAF V6500E阴性,而3例患者携带BRAF V6500E突变,并在四个月至两年后复发。

Broccoli表示:“ddPCR技术是一种高度灵敏的方法,比传统的PCR技术要灵敏得多。这在评估毛细胞白血病的疾病负荷时尤其重要,因为突变往往只存在于极少量的循环细胞中。”

ddPCR vs. RT-qPCR

在监测慢性粒细胞白血病(CML)患者是否响应酪氨酸激酶抑制剂时,检测BCR-ABL1融合转录本的水平是一种有效的方法。为了评估ddPCR在监测CML患者中的潜在价值,意大利都灵大学的Carmen Fava及其同事最近开展了一项多中心研究,以比较ddPCR和RT-qPCR。

三个不同实验室的研究人员利用这两种方法对37例患者的BCR-ABL1融合转录本水平进行了定量。他们发现,ddPCR与RT-qPCR有着良好的一致性,不过,ddPCR能够更精确地定量BCR-ABL1转录本,特别是在分子响应较低(MR 4和4.5)时。

“ddPCR试剂盒有着良好的重复性,并在多个试验和报告中表现出让人振奋的结果,这表明ddPCR技术有望在临床中常规使用,以帮助临床医生判断何时可以停止治疗,”Fava说。

ddPCR vs. NGS

在检测BCR-ABL1突变时,Sanger测序也是一种常用方法。这种突变会导致CML患者在接受酪氨酸激酶抑制剂治疗时出现耐药性,从而导致疗效不佳。博洛尼亚大学的Simona Soverini博士等人最近利用基于新一代测序(NGS)和ddPCR的多重检测方法来筛查13种BCR-ABL1突变,看看它们是否能够取代Sanger测序。

初步评估结果显示,ddPCR鉴定出的突变与NGS高度一致(> 90%)。不过,ddPCR的周转时间仅为一天,而NGS需要15个工作日。因此,研究人员认为,多重ddPCR检测将是一种更简便、更快速和更经济的NGS替代方法,可用来检测治疗效果不佳的患者所携带的突变。(生物通 薄荷)

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