LUNA FL细胞计数仪助力Cell新冠研究文章发表

新型冠状病毒（COVID-19）的迅速蔓延已经成为全球卫生安全、经济的重大挑战。据报道，截止到2020年10月份中旬，已有3800多万病例和100多万相关死亡病例。在众多病例中，重症患者的主要特点是免疫反应失调。大部分研究报道也集中在COVID-19重症患者免疫反应失调机制的研究，这些研究的主要手段就是从单细胞层面（single-cell analytics）对外周血单核细胞(PBMCs)进行分析。而对于轻度与中度COVID-19患者基于组学层面的关联研究还不是很多。
 
2020年10月，美国拉根研究所、麻省理工学院、哈佛医学院和麻省总医院的科学家们合作利用多组学解析了轻度和中度COVID-19之间的急剧变化状态。在Cell上发表了题为Multi-omics resolves a sharp disease-state shift between mild and moderate COVID-19的论文。作者对139名不同严重程度的COVID-19患者（这些患者代表了疾病严重程度的所有水平）的临床检测结果、免疫细胞和血浆多组学（plasma multi-omics）数据进行了综合分析,确定了轻度和中度病症之间的一个主要转变，即炎症信号升高伴随着特定种类代谢产物和代谢过程的丢失，在中度症状患者的应激血浆环境中，出现了多种异常的免疫细胞表型，并且这些异常的细胞表型随着疾病严重程度的加剧而增多。

作者对139名不同严重程度的COVID-19患者（这些患者代表了疾病严重程度的所有水平）的临床检测结果、免疫细胞和血浆多组学（plasma multi-omics）数据进行了综合分析,确定了轻度和中度病症之间的一个主要转变，即炎症信号升高伴随着特定种类代谢产物和代谢过程的丢失，在中度症状患者的应激血浆环境中，出现了多种异常的免疫细胞表型，并且这些异常的细胞表型随着疾病严重程度的加剧而增多。

作者在文中对PBMC进行计数时使用了较准确的LUNA FL多功能细胞计数仪基于荧光染料AO/PI双染的模块进行细胞计数。

从患者全血获取到细胞计数的具体操作protocol如下：

1. 用真空采血管(EDTA抗凝管)收集患者血液。
2. 4℃ 800xg离心10分钟后收集血浆成分，分装保存至-80℃。
3. Ficoll密度梯度离心法获取PBMC : 剩余的血液用PBS (pH7.2)稀释至原体积的2倍，转移至装有15mL Ficoll（蔗糖的多聚体）的SepMate-50管子中。室温800xg离心15 min取PBMC层。
4. 将PBMC层转移至50ml锥形管中，用autoMACS冲洗液洗涤2次，250xg离心10 min，倒掉上清液。
5. 用5ml冲洗液重悬PBMC,取5ul PBMC稀释10倍用于细胞计数。
6. 取18µL细胞样品和2µL Acridine Orange/Propidium Iodide 染料混合进行染色。染色后用移液枪吸取10µL样品加到芯片中，使用Luna FL 多功能细胞计数仪进行细胞计数(Logos Bioystems)

Luna FL 多功能细胞计数仪

计数后，对PBMCs进行单细胞多组学分析（全转录组分析、192种表层蛋白标志物，T&B细胞受体（TCR&BCR））和分泌蛋白质组学的研究；对血浆进行蛋白质组学和代谢组学的分析。

新冠病毒研究通常会对PBMCs进行计数和分析，计数时常遇到的难点就是PBMCs中红细胞的污染，如果基于明场的方法对PBMCs进行计数，PBMCs样品中红细胞的污染会导致测量浓度和活性的误差。然而文中所使用的配备双色荧光通道的LUNA FL自动细胞计数仪提供了基于荧光场对PBMC计数完整的解决方案，可以区分出PBMCs中的活细胞、死细胞，排除掉血细胞、血小板和细胞碎片对PBMC的计数影响，实现PBMCs的准确计数。

图2  对PBMCs进行荧光细胞计数

图2结果展示了LUNA FL对PBMCs进行计数时，可以通过AO/PI染色的细胞荧光信号区分并对死细胞和活细胞进行计数，红细胞及血小板没有荧光信号，不能被计数，可以排除其干扰，从而实现对PBMCs的准确计数。

LUNA FL多功能细胞计数仪可兼容重复性芯片和一次性芯片，让后续使用无后顾之忧。

同时具有四大功能：
1. 明场计数，支持Trypan blue or   Erythrosin B 染料
2.  荧光场计数，支持AO/PI、FDA/PI等
3.  酵母细胞计数，支持FDA/PI
4.  转染效率的评估

参考文献：Multi-omics resolves a sharp disease-state shift between mild and moderate COVID-19

LUNA FL多功能细胞计数仪支持免费试用，如果您想了解更多内容，可以扫描下方技术人员的二维码进行沟通。

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