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新一代TMTpro 16plex蛋白定量分析标记技术来啦!

【字体: 时间:2020年04月24日 来源:吉凯基因

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  如今,Thermo Fisher推出了全新的TMTpro 16plex,一次性将通道扩展到了16个,也就是说一次性可以容纳16个样本的分析。

蛋白组学技术已经成为解决重要生物学问题的重要工具。TMT技术因为稳定性好、定量可靠、挖掘深度高等特点更是成为蛋白质组学技术中最重要的一种方法。然而TMT技术在实际应用过程中还是因为样本通量局限的问题而明显受限。

如今,Thermo Fisher推出了全新的TMTpro 16plex,一次性将通道扩展到了16个,也就是说一次性可以容纳16个样本的分析。

以往,TMT试剂最高的通量是11个样本,常见的4组*4重复、5组*3重复、4组*3重复等实验设计的蛋白质组定量分析都需要缩减分析样本或者将样本分在不同标记组中来实现。以5组3重复为例有三种解决方案:

1. 减少样品的组内重组数,每组设置两个重复,使样本总量降至11个以内,但减少了组内重复性的数据;

2. 分成三个标记组,不同组间用内标连接,需要三倍的质谱检测与数据分析,降低了检测速度;

A1 B1 C1 D1 E1 内标混样
A2 B2 C2 D2 E2 内标混样
A3 B3 C3 D3 E3 内标混样

3. 将每组样本随机分配到三个标记组中,但增加了数据可重复性和稳定性的风险,依旧需要三倍的质谱检测与数据分析。

A1 B1 C1 D1 E1
A2 B2 C2 D2 E2
A3 B3 C3 D3 E3

如今,随着TMTpro 16plex的问世可以实现一次性分析5组三重复的实验,就是这么轻松就是这么简单,相较于以往大大节约了实验成本。

2020年4月,李嘉铭博士发表在《Nature Methods》上的研究结果显示:作为新一代的蛋白定量研究标记试剂——TMTpro 16plex的标记效率极高,具有可靠的定量效力,同时TMTpro 16plex标记可以做到12天内常温条件下几乎不受影响,稳定性极高。

值得关注的一点是,这篇文章使用TMT 16plex鉴定到了8802个蛋白,并且发现其重复性极佳,增加了实验数据的可靠性、可信赖性。

综上:

1. 更高的通量:可一次实现16个样本的蛋白质定性定量分析;
2. 更稳定的数据:所有样本具有一致的分离鉴定条件,可以为重复样本间带来更高的重复性和稳定性,增强定性定量的准确性;
3. 更佳的成果:更高的蛋白鉴定量和定量蛋白数,使得样本间及重复样本间的缺失值更少;
 
应用方向参考
 
1. 生理、病理、药物作用机制;
2. 临床诊断的研究:biomarker发现、药物筛查;
3. 精准医疗:药物开发、个性化治疗等。
 
TMTpro 16plex技术原理
 
TMTpro 16plex 标记试剂与之前的TMT 6标和TMT 10标一样分为三个部分(如下图A),标记试剂上的胺反应基团高效的与肽段结合,确保了一如既往的高标记效率,而TMTpro标签具有更长的平衡基团和异丁基脯氨酸质量报告基团,在HCD模式裂解后,不同样品来源的肽段可以在高分辨率MS/MS 图谱的低质量区生成一个独特的报告集团质量(126-134Da)从而完成蛋白的相对定量(下图B)。形象地说,就是通过衣服来比较胖瘦,TMT试剂就是那件衣服。

吉凯优势

吉凯基因蛋白质组学服务技术升级--TMTpro 16plex 标记定量技术。我们最新推出16标定量技术的产品流程和服务,技术核心采用TMTpro 16pelx标记试剂盒,这是吉凯在蛋白组质谱技术上的合作伙伴赛默飞最新推出的多重标记试剂盒。该技术可以将一次定量的样本数提升到16个,一次性完成4组*4重复、5组*3重复、4组*3重复等实验设计的蛋白质组定量工作,为更复杂的实验设计提供了可能,比如考虑更多的生物学重复,更可以同时评价剂量-反应、时间-进程、对照组等不同处理对蛋白质表达结果的影响。提高分析速度的同时实现了更高的通量和蛋白组覆盖深度,还能提升蛋白鉴定和定量的数量与稳定性。

【参考文献】
Jiaming,Li. et al. TMTpro reagents: a set of isobaric labeling mass tags enables simultaneous proteome-wide measurements across 16 samples. Nature Methods( 2020).


 

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