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不一样的EMSA检测方法,您不想试一试?

【字体: 时间:2020年07月17日 来源:基因有限公司

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  LI-COR Odyssey双色近红外成像技术可替代放射性EMSA检测,提供方便、快捷、安全的EMSA检测方法。

美国LI-COR公司开发的Odyssey双色近红外激光成像系统因检测背景更低、线性动态范围更广、可实现准确定量、重复性高、分析软件不改变原始数据且方便快捷、提供Western Blot完整解决方案而被Nature等期刊杂志推荐认可,它的应用很广泛,不仅仅用于WB成像,还可用于EMSA、In-Cell Western、In-Gel Western、Protein Array、Organ、Tissue Section、Protein Gel、DNA Gel等的成像。今天要隆重介绍的就是Odyssey双色近红外荧光技术在EMSA检测中的应用。

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,也可以用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

传统的EMSA是用同位素标记DNA,通过显影的方式进行检测,这种方式步骤繁琐且会对环境和人体造成危害。用近红外荧光染料IRDye 代替同位素标记DNA片段进行EMSA实验,凝胶可直接在Odyssey双色近红外激光成像系统上成像,无需转膜,更方便、安全、快捷。


EMSA/凝胶迁移示意图。加入过量的DNA,当DNA与蛋白结合时,形成的复合物较游离的核酸迁移率会大大降低。IRDye 700荧光标记在DNA两条链的末端,可用于迁移率的检测。

一、EMSA技术原理与实验流程

二、Odyssey 近红外荧光EMSA检测:省时、安全、快捷


三、EMSA研究应用

近红外荧光技术在EMSA中的主要研究应用包括:转录调控 、DNA复制、DNA修复、RNA处理等。


EMSA/凝胶迁移率分析。 IRDye 700 EMSA是用3个不同的转录因子靶标共有的寡核苷酸进行分析。箭头指示迁移的位置。


使用IRDye 700末端标记的寡核苷酸双链体的AP-1 EMSA。
血清处理后的HeLa细胞核提取物用于观察血清刺激后增加的AP-1结合。 竞争反应含有100倍摩尔过量的未标记的寡核苷酸双链体。 箭头指示荧光寡聚物的迁移位置。 星号表示由于过量的未标记竞争者DNA导致的迁移率降低。 湿凝胶用Odyssey Classic Infrared Imager成像。


使用IRDye 700 (red) or IRDye 800 (green)标记都包含T7启动子的两个DNA片段,分析两个DNA片段与T7 RNA酶的竞争性结合。两个DNA片段其实都包含T7启动子,这两个片段分别是野生型和突变型,分别用700nm和800nm的染料标记,标记好后T7 RNA酶与两种不同的核酸进行混合,然后进行孵育,来分析T7蛋白和哪种核酸的结合能力更强,相当于是一个双色EMSA实验。通过结果可以看出突变型的DNA片段和T7蛋白结合更强(通过荧光信号的强度值来进行判断)。

四、Odyssey近红外荧光EMSA检测优势

▪ 快速方便,直接检测,核酸胶直接成像,无需移除玻璃板,无需转膜;
▪ 近红外荧光标记的寡核苷酸稳定性较高;
▪ 双通道同时检测,不同荧光标记的寡核苷酸可同时检测,可用于双色EMSA实验;
▪ 实验过程无放射性危险,安全无害。

五、LI-COR Odyssey EMSA配套试剂

LI-COR Odyssey现在已有下面一些商品化的标记好的荧光试剂,如果想自己标记,可在国内的标记引物公司进行探针标记。

这么方便、智能、快捷的Odyssey双色近红外激光成像系统究竟长什么样,下面就为大家揭晓,目前它有两个型号:Odyssey CLx成像系统和Odyssey Fc成像系统,两个型号在应用上有所区别,但都可以给您带来不一样的体验。

欲了解更多详情及应用,欢迎扫描下方微信二维码与我们技术人员一对一在线联系......

基因有限公司作为LI-COR近红外成像系统中国区代理商,为您提供专业的近红外成像解决方案、提供更多应用咨询及技术支持。欲进一步了解详细内容,请关注我们的官方微信“基因快讯”或联系您身边的基因有限公司工作人员。

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