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看,逮到一只研究毒理学的小帮手

【字体: 时间:2020年07月09日 来源:基因有限公司

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  Thermo Scientific™ NanoDrop分光光度计助力您完成毒理学研究。

细胞毒性试验是评估病况、毒理学、药物疗效和安全的重要一环;如新的药物、化妆品、食品添加剂在投入使用之前,都必须进行大量的细胞毒性试验。许多细胞增殖/细胞毒性试验通常使用紫外-可见光进行分析,而Thermo Scientific™ NanoDrop分光光度计则利用先进的样品基座技术,仅需1μL即可完成紫外-可见吸收光的测量。这种微量检测能力可显著降低实验成本。此外, NanoDrop配备了更加灵活、界面友好的软件,包括针对常见应用的预配置程序,以及自定义方法功能,即可为您特定需求而量身定制。

实验背景介绍

检测细胞增殖、细胞毒性的常用方法之一为MTS检测法。MTS为新一代四氮唑蓝盐化合物,即被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还原成有色的甲瓒产物,其颜色深浅与某些敏感活细胞数在一定范围内呈高度相关。通过测量490nm处的吸光度,可对甲瓒进行定量,亦可判断细胞活性。

实验借助NanoDrop分析了MTS还原为甲瓒的速率,确定最佳的分析时间。此外,还研究了胺碘酮在HepG2细胞中的量效关系(胺碘酮是临床前药物安全性评价中常见的肝毒性阳性对照,HepG2是人源性肝细胞系)。

实验过程

确定最佳吸收波长

该实验首先使用NanoDrop One/OneC创建一个自定义方法,对待测物进行全光谱扫描。实验测量范围设置为可见光范围(350–840 nm),如下图1所示,发现在490 nm处出现吸收光峰值。根据甲瓒吸收光谱,在750 nm处作为基线从而校正参数。


图1:MTS/甲瓒的吸收光谱。

HepG2细胞以1.5×104细胞/孔的密度铺板,培养48小时后,向100µL细胞培养基中添加CellTiter 96 AQueous One Solution试剂 20µL。于37℃培养105分钟,使用NanoDrop One/OneC分光光度计进行测量。

确定最佳检测时间

为了确定最佳检测时间,监测HepG2细胞中MTS还原为甲瓒的速率。将HepG2细胞接种到96孔板中,培养48小时后进行MTS分析,使用NanoDrop One/OneC分光光度计测量490 nm处的吸光度值。结果如图2显示,HepG2细胞中的脱氢酶正在有效地将MTS还原为甲瓒,吸光度值随时间而增加。


图2: MTS还原为甲瓒的速率

检测胺碘酮对HepG2细胞活力的影响
实验还检测了胺碘酮对HepG2细胞活力的影响。将HepG2细胞接种于96孔板中,培养24小时。用不同浓度的胺碘酮处理细胞培养24小时,使用NanoDrop One/OneC分光光度计测量490 nm处的吸光度,MTS分析如图3所示。


图3:胺碘酮对HepG2细胞的作用

如图3所示,当用胺碘酮处理HepG2细胞时,发现吸光度值随胺碘酮的用量而降低。该实验证实胺碘酮可降低HepG2细胞的活力,因此,胺碘酮对HepG2细胞具有细胞毒性。同时该实验也可表明,NanoDrop OneC分光光度计在细胞毒性实验中具有通用性。

小结

本实验展示了使用Thermo Scientific NanoDrop分光光度计的来进行细胞增殖/细胞毒性分析。即使在最佳吸收波长未知的情况下,也可通过NanoDrop的进行全光谱扫描,来确定待测物质的最佳吸收光值,进行数据收集和分析。同时,NanoDrop 分光光度计也适用优化实验条件分析。且样本微量取样,便于对同一样本进行重复取样。随着研究人员通过对同一组细胞进行多次检测,可收集更多关于细胞毒性机制的信息。

Thermo fisher公司的NanoDrop One/OneC超微量分光光度计,内置基于参考光谱数据库,结合独特的算法开发的Acclaro软件,能够准确识别、鉴定出待测样品中的污染物质,并实时给出校正后样品真实浓度。

基因有限公司作为NanoDrop产品中国区合作伙伴,为您提供优质的售后服务保障,让您在使用过程中无后顾之忧。如您需要了解更多信息,可添加下方技术人员企业微信号,也可联系您身边的基因有限公司员工。

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