看，逮到一只研究毒理学的小帮手

Thermo Scientific™ NanoDrop分光光度计助力您完成毒理学研究。

细胞毒性试验是评估病况、毒理学、药物疗效和安全的重要一环；如新的药物、化妆品、食品添加剂在投入使用之前，都必须进行大量的细胞毒性试验。许多细胞增殖/细胞毒性试验通常使用紫外-可见光进行分析，而Thermo Scientific™ NanoDrop分光光度计则利用先进的样品基座技术，仅需1μL即可完成紫外-可见吸收光的测量。这种微量检测能力可显著降低实验成本。此外， NanoDrop配备了更加灵活、界面友好的软件，包括针对常见应用的预配置程序，以及自定义方法功能，即可为您特定需求而量身定制。

实验背景介绍

检测细胞增殖、细胞毒性的常用方法之一为MTS检测法。MTS为新一代四氮唑蓝盐化合物，即被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还原成有色的甲瓒产物，其颜色深浅与某些敏感活细胞数在一定范围内呈高度相关。通过测量490nm处的吸光度，可对甲瓒进行定量，亦可判断细胞活性。

实验借助NanoDrop分析了MTS还原为甲瓒的速率，确定最佳的分析时间。此外，还研究了胺碘酮在HepG2细胞中的量效关系（胺碘酮是临床前药物安全性评价中常见的肝毒性阳性对照，HepG2是人源性肝细胞系）。

实验过程

确定最佳吸收波长

该实验首先使用NanoDrop One/OneC创建一个自定义方法，对待测物进行全光谱扫描。实验测量范围设置为可见光范围（350–840 nm），如下图1所示，发现在490 nm处出现吸收光峰值。根据甲瓒吸收光谱，在750 nm处作为基线从而校正参数。

图1：MTS/甲瓒的吸收光谱。

HepG2细胞以1.5×104细胞/孔的密度铺板，培养48小时后，向100µL细胞培养基中添加CellTiter 96 AQueous One Solution试剂 20µL。于37℃培养105分钟，使用NanoDrop One/OneC分光光度计进行测量。

确定最佳检测时间

为了确定最佳检测时间，监测HepG2细胞中MTS还原为甲瓒的速率。将HepG2细胞接种到96孔板中，培养48小时后进行MTS分析，使用NanoDrop One/OneC分光光度计测量490 nm处的吸光度值。结果如图2显示，HepG2细胞中的脱氢酶正在有效地将MTS还原为甲瓒，吸光度值随时间而增加。

图2: MTS还原为甲瓒的速率

检测胺碘酮对HepG2细胞活力的影响
实验还检测了胺碘酮对HepG2细胞活力的影响。将HepG2细胞接种于96孔板中，培养24小时。用不同浓度的胺碘酮处理细胞培养24小时，使用NanoDrop One/OneC分光光度计测量490 nm处的吸光度，MTS分析如图3所示。

图3：胺碘酮对HepG2细胞的作用

如图3所示，当用胺碘酮处理HepG2细胞时，发现吸光度值随胺碘酮的用量而降低。该实验证实胺碘酮可降低HepG2细胞的活力，因此，胺碘酮对HepG2细胞具有细胞毒性。同时该实验也可表明，NanoDrop OneC分光光度计在细胞毒性实验中具有通用性。

小结

本实验展示了使用Thermo Scientific NanoDrop分光光度计的来进行细胞增殖/细胞毒性分析。即使在最佳吸收波长未知的情况下，也可通过NanoDrop的进行全光谱扫描，来确定待测物质的最佳吸收光值，进行数据收集和分析。同时，NanoDrop 分光光度计也适用优化实验条件分析。且样本微量取样，便于对同一样本进行重复取样。随着研究人员通过对同一组细胞进行多次检测，可收集更多关于细胞毒性机制的信息。

Thermo fisher公司的NanoDrop One/OneC超微量分光光度计，内置基于参考光谱数据库，结合独特的算法开发的Acclaro软件，能够准确识别、鉴定出待测样品中的污染物质，并实时给出校正后样品真实浓度。

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